上(shàng)海RNA抽(chōu)提(tí)操(cāo)作步驟(zhòu):

　　1. 匀漿處理:

　　a.組(zǔ)織(zhī) 將組(zǔ)織在(zài)液氮中磨碎,每50-100mg組織(zhī)加入1ml TRIzol,用匀(yún)漿(jiāng)儀進行(háng)匀漿(jiāng)處理。樣(yàng)品體(tǐ)積不應超(chāo)過(guò)TRIzol體(tǐ)積10℅。

　　b.單(dān)層(céng)培(péi)養細(xì)胞 直接在培(péi)養板中(zhōng)加入TRIzol裂解(jiě)細胞(bāo)
，每10cm2麵積（即3.5cm直(zhí)徑的培養(yǎng)板(bǎn)）加(jiā)1ml
，用(yòng)移(yí)液器吸(xī)打幾次(cì)。TRIzol的用(yòng)量(liáng)應根(gēn)據培(péi)養(yǎng)板(bǎn)麵(miàn)積而(ér)定(dìng)
，不(bù)取決於細(xì)胞數(shù)。TRIzol加(jiā)量(liáng)不足可(kě)能導致(zhì)提(tí)取的(dí)RNA有DNA汙染。

　　c．細胞懸液 離心收集(jí)細胞
，每5-10×106動物，植物，酵母(mǔ)細胞(bāo)或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol
，反(fǎn)復吸打(dǎ)。加(jiā)TRIzol之前不要洗滌(dí)細(xì)胞以(yǐ)免(miǎn)mRNA降(jiàng)解。一些酵母和(hé)細菌細(xì)胞(bāo)需用匀(yún)漿儀(yí)處(chǔ)理。

　　2．將(jiāng)匀漿樣品在(zài)室(shì)溫（15-30℃）放(fàng)置(zhì)5分鐘
，使核酸蛋白(bái)復(fù)合物(wù)*分離。

上(shàng)海RNA抽提可分(fēn)為信(xìn)使(shǐ)RNA，轉(zhuǎn)運RNA和核糖(táng)體RNA三(sān)大(dà)類
，不同組織(zhī)總RNA提(tí)取實(shí)質(zhì)就(jiù)是將細(xì)胞裂解
，釋放出RNA
，並(bìng)通過(guò)不同(tóng)方(fāng)式(shì)去除(chú)蛋白，DNA等雜(zá)質
，zui終(zhōng)獲(huò)得高純RNA產物的過程(chéng)。 由(yóu)於RNA樣品(pǐn)易受環境因(yīn)素特(tè)別是RNA酶(méi)的(dí)影響而降

可選步驟(zhòu)：如樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)含有較多(duō)蛋(dàn)白質(zhì)
，脂(zhī)肪(fáng)
，多糖(táng)或胞外物質（肌肉
，植(zhí)物(wù)結(jié)節(jié)部分等）可於(yú)2-8℃10000×g離(lí)心10分鐘(zhōng)
，取上(shàng)清(qīng)。離心(xīn)得(dé)到的沉澱(diàn)中(zhōng)包(bāo)括(kuò)細(xì)胞外(wài)膜
，多(duō)糖(táng)
，高(gāo)分(fēn)子(zǐ)量(liáng)DNA
，上(shàng)清中含有RNA。處理(lǐ)脂肪組(zǔ)織時(shí)
，上層(céng)有(yǒu)大(dà)量油脂應(yīng)去除(chú)。取(qǔ)澄(chéng)清(qīng)的匀漿液進行下一步(bù)操作。

　　1，劇烈振(zhèn)蕩(dàng)15秒(miǎo)
，室(shì)溫放(fàng)置3分鐘(zhōng)。

　　2. 2-8℃10000×g離心(xīn)15分(fēn)鐘。樣(yàng)品(pǐn)分為三(sān)層(céng)：底層為(wéi)黃色有(yǒu)機(jī)相
，上層為(wéi)無色(sè)水(shuǐ)相(xiāng)和一個中間層。RNA主要在(zài)水相中
，水(shuǐ)相體積(jī)約為(wéi)所用TRIzol試劑(jì)的(dí)60℅。

　3. 把水相(xiāng)轉移到(dào)新管中
，如要分離(lí)DNA和(hé)蛋白質可(kě)保留有(yǒu)機相(xiāng)
，進(jìn)一步操作見(jiàn)後。用異(yì)丙醇沉澱水相中的RNA。每(měi)使(shǐ)用(yòng)1ml TRIzol加(jiā)入0.5ml異(yì)丙(bǐng)醇(chún)
，室溫(wēn)放置(zhì)10分(fēn)鐘。

　4. 2-8℃10000×g離(lí)心(xīn)10分鐘(zhōng)
，離心前(qián)看(kàn)不出(chū)RNA沉澱(diàn)
，離心後在管側和管底(dǐ)出現膠狀沉澱(diàn)。移去(qù)上清。