RNA抽(chōu)提(tí)

簡(jiǎn)要(yào)描(miáo)述：RNA可分為信(xìn)使RNA，轉(zhuǎn)運RNA和核糖(táng)體(tǐ)RNA三(sān)大(dà)類，不同(tóng)組(zǔ)織(zhī)總RNA提取實質就是將細(xì)胞裂(liè)解，釋放出RNA，並通過不同方(fāng)式(shì)去除蛋(dàn)白，DNA等(děng)雜(zá)質，Z終獲(huò)得高純RNA產物(wù)的過程(chéng)。由於(yú)RNA樣(yàng)品(pǐn)易受環(huán)境因素特別是RNA酶的(dí)影響而降(jiàng)解，提取高(gāo)質量(liáng)的RNA樣品在(zài)生命科研中具有(yǒu)相(xiāng)當的挑(tiāo)戰性。RNA提取對樣(yàng)品的新鮮性要求非(fēi)常高，獲取樣品後立(lì)即提(tí)取RNA，若(ruò)無(wú)條件(jiàn)立即實(shí)驗，應(yīng)於-80℃或液氮中(zhōng)。

產品型號(hào)：
廠(chǎng)商(shāng)性(xìng)質：生產(chǎn)廠家
更新(xīn)時(shí)間(jiān)：2024-05-13
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產(chǎn)品(pǐn)介(jiè)紹：

RNA抽(chōu)提操作步驟(zhòu):

　　1. 匀漿(jiāng)處(chǔ)理(lǐ):

　　a.組織將(jiāng)組織在液氮中(zhōng)磨碎,每50-100mg組(zǔ)織加入(rù)1ml TRIzol,用(yòng)匀(yún)漿儀進行匀(yún)漿(jiāng)處理(lǐ)。樣(yàng)品(pǐn)體(tǐ)積不應超(chāo)過(guò)TRIzol體(tǐ)積10℅。

　　b.單層培(péi)養細(xì)胞(bāo) 直接在(zài)培養板中加入TRIzol裂(liè)解細(xì)胞(bāo)，每10cm2麵(miàn)積（即(jí)3.5cm直徑的培(péi)養板）加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的(dí)用量(liáng)應根(gēn)據培(péi)養(yǎng)板(bǎn)麵(miàn)積(jī)而定，不取決於細(xì)胞數。TRIzol加量不(bù)足可(kě)能(néng)導(dǎo)致提取的(dí)RNA有DNA汙染(rǎn)。

　　c．細(xì)胞(bāo)懸液離(lí)心(xīn)收集(jí)細胞(bāo)，每(měi)5-10×106動物(wù)，植物(wù)，酵母細胞(bāo)或1×107細菌細胞加(jiā)入(rù)1ml TRIzol，反復吸(xī)打(dǎ)。加TRIzol之前(qián)不要(yào)洗滌(dí)細胞以(yǐ)免(miǎn)mRNA降解。一(yī)些(xiē)酵母和(hé)細(xì)菌細胞需用匀漿儀處理(lǐ)。

　　2．將匀漿(jiāng)樣(yàng)品(pǐn)在(zài)室溫（15-30℃）放置(zhì)5分鐘，使核酸蛋白復合物(wù)*分(fēn)離(lí)。

　　3．可選(xuǎn)步驟：如樣品中含有較多(duō)蛋白(bái)質(zhì)，脂(zhī)肪，多糖或胞外(wài)物質(zhì)（肌肉(ròu)，植物(wù)結(jié)節部分(fēn)等(děng)）可(kě)於2-8℃10000×g離心(xīn)10分鐘，取上清。離心(xīn)得(dé)到(dào)的沉澱(diàn)中包(bāo)括(kuò)細(xì)胞(bāo)外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含(hán)有RNA。處(chǔ)理(lǐ)脂肪(fáng)組織時，上層(céng)有(yǒu)大量油脂應去(qù)除。取澄(chéng)清(qīng)的匀漿液(yè)進行(háng)下(xià)一(yī)步(bù)操作。

　　5. 每使(shǐ)用(yòng)1ml TRIzol加(jiā)入0.2ml氯仿(fǎng)，劇(jù)烈(liè)振蕩(dàng)15秒，室溫放置3分鐘。

　　6. 2-8℃10000×g離(lí)心15分(fēn)鐘。樣(yàng)品(pǐn)分為三(sān)層：底層為(wéi)黃色有機相，上(shàng)層為(wéi)無(wú)色水相和(hé)一(yī)個中(zhōng)間層(céng)。RNA主要在水相中，水相(xiāng)體積約為(wéi)所用(yòng)TRIzol試(shì)劑的60℅。

　　7. 把(bǎ)水(shuǐ)相轉(zhuǎn)移到新管(guǎn)中(zhōng)，如(rú)要分(fēn)離DNA和蛋白(bái)質(zhì)可(kě)保(bǎo)留有(yǒu)機相，進一步(bù)操(cāo)作(zuò)見後。用異(yì)丙(bǐng)醇(chún)沉澱水相中的(dí)RNA。每(měi)使(shǐ)用1ml TRIzol加入0.5ml異丙(bǐng)醇(chún)，室溫放(fàng)置10分鐘(zhōng)。

　　8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉澱，離心(xīn)後(hòu)在(zài)管側和管底出現膠(jiāo)狀(zhuàng)沉澱。移(yí)去上清。

　　9. 用75℅乙(yǐ)醇洗滌RNA沉(chén)澱(diàn)。每(měi)使(shǐ)用1ml TRIzol至(zhì)少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超過7500×g離(lí)心(xīn)5分(fēn)鐘(zhōng)，棄(qì)上清。

　　10.室溫(wēn)放置(zhì)幹燥(zào)或真空(kōng)抽(chōu)幹RNA沉(chén)澱(diàn)，大約晾5-10分鐘(zhōng)即可(kě).不要真空離心幹(gān)燥，過(guò)於(yú)幹(gān)燥會(huì)導(dǎo)致RNA的溶解性大大降低。加入(rù)25-200μl無(wú)RNase的水或0.5℅SDS,用(yòng)槍頭(tóu)吸打(dǎ)幾(jī)次,55-60℃放(fàng)置10分(fēn)鐘(zhōng)使(shǐ)RNA溶解.如RNA用(yòng)於酶(méi)切反(fǎn)應,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的(dí)去離(lí)子(zǐ)甲酰(xiān)胺溶(róng)解(jiě)，-70℃保存。