AxyPrep-96 DNA凝膠回(huí)收試劑盒 
本試劑盒適合從各(gè)種瓊脂(zhī)糖凝膠(jiāo)中(zhōng)回收(shōu)多至 8 μg 長度在(zài) 70 bp-10 kb 的片段，回收率(shuài)為 60-85%。瓊(qióng)脂糖(táng)凝膠(jiāo)在(zài)溫和的緩(huǎn)衝(chōng)液（DE-A溶液）中(zhōng)熔化，其中(zhōng)的保護劑能(néng)防止(zhǐ)綫狀(zhuàng) DNA在(zài)高(gāo)溫(wēn)下降解，然後(hòu)在(zài) DE-B溶液的(dí)作(zuò)用下(xià)使 DNA選(xuǎn)擇(zé)性地結合(hé)到膜上。純化(huà)的 DNA純度高(gāo)，並(bìng)保持片段完整性(xìng)和高生(shēng)物活(huó)性(xìng)，可(kě)直(zhí)接用(yòng)於連接(jiē)，體外轉錄，PCR 擴(kuò)增(zēng)，測序(xù)，微(wēi)注(zhù)射(shè)等(děng)分(fēn)子生物學(xué)實驗。 
 
一，試(shì)劑(jì)盒(hé)組(zǔ)成，貯存，穩(wěn)定性 
Cat. No. AP-96-GX-1 AP-96-GX-4 AP-96-GX-24 
製備次數 1×96 prep 4×96 preps 24×96 preps 
96-well DNA plate- A 1 4 24 
96-well 2.2 ml growblock 2 8 48 
96-well V-bottom sample plate 1 4 24 
Adhesive film 3 15 75 
Silicone mat 1 4 24 
Buffer DE-A 40 ml 165 ml 2×480 ml 
Buffer DE-B 29 ml 80 ml 480 ml 
Buffer W2 concentrate 72 ml 2×72 ml 6×150 ml 
Eluent 10 ml 25 ml 110 ml 
說(shuō)明書(shū) 1 1 1 
96-well DNA plate- A：96孔 DNA製備(bèi)板。 
Buffer DE-A：凝膠(jiāo)熔化劑，含 DNA保(bǎo)護劑，防(fáng)止 DNA在(zài)高溫(wēn)下降解。室(shì)溫密閉貯(zhù)存(cún)。 
Buffer DE-B：結合液（促使(shǐ)大(dà)於 70bp 的 DNA選擇(zé)性結合(hé)到 DNA製(zhì)備膜(mó)上）。室溫密(mì)閉貯存。 
Buffer W2 concentrate：去鹽液(yè)。*使(shǐ)用前(qián)，必(bì)須按試劑瓶上的體積加入無水乙醇(chún)（可(kě)用 100%
乙醇(chún)或(huò) 95%乙(yǐ)醇），充分混合(hé)後(hòu)使(shǐ)用。每次使(shǐ)用(yòng)後(hòu)需(xū)將(jiāng)瓶蓋蓋緊，以(yǐ)保(bǎo)持W2中的(dí)乙(yǐ)醇含量。 
Eluent：洗脫液，室(shì)溫(wēn)密(mì)閉(bì)貯存。 
二，注(zhù)意事(shì)項 
1. Buffer DE-A（含(hán)有(yǒu)β-巰(qiú)基乙醇）和 Buffer DE-B含刺激性化合物(wù)，操作(zuò)時要戴乳膠手套和(hé)防(fáng)護(hù)眼
鏡(jìng)，避免(miǎn)沾染皮(pí)膚，眼(yǎn)睛(jīng)和(hé)衣服(fú)，謹防(fáng)吸(xī)入口鼻(bí)。若(ruò)沾(zhān)染皮膚，眼睛時(shí)，要(yào)立即(jí)用(yòng)大量清(qīng)水(shuǐ)或生(shēng)理
鹽水衝洗，必要時尋求醫療咨詢(xún)。 
2. 在(zài)步驟(zhòu) 1中，將凝膠切成(chéng)細小的(dí)碎塊(kuài)可大大縮(suō)短凝(níng)膠熔化時間(jiān)（綫(xiàn)性(xìng) DNA長(cháng)時(shí)間(jiān)暴露在高溫(wēn)條件(jiàn)
下(xià)易(yì)於(yú)水解），從(cóng)而提高回收率(shuài)。勿將含(hán)DNA 的凝(níng)膠(jiāo)長(cháng)時間(jiān)地暴(bào)露在紫(zǐ)外(wài)燈下(xià)，減(jiǎn)少(shǎo)紫(zǐ)外綫對DNA
造成的(dí)損(sǔn)傷。 
3. 在步(bù)驟 2中(zhōng)凝膠必(bì)須(xū)*熔(róng)化，否則將(jiāng)嚴(yán)重(zhòng)影響(xiǎng) DNA回(huí)收(shōu)率(shuài)。 
4. DNA 分(fēn)子呈(chéng)酸(suān)性，建(jiàn)議在 2.5 mM Tris-HCl，pH7.0-8.5的洗(xǐ)脫液中(zhōng)保(bǎo)存(cún)。 
三(sān)，實(shí)驗(yàn)準備 
1. 準(zhǔn)備無(wú)核酸和核酸酶汙(wū)染的 Tip 頭(tóu)。
2. *次(cì)使(shǐ)用前，在(zài) Buffer W2 concentrate中(zhōng)加入體(tǐ)積(jī)的無(wú)水乙(yǐ)醇。 
3. 準(zhǔn)備 75 °C 水浴。 
4. 使(shǐ)用(yòng)前，檢查(chá) Buffer DE-B是否(fǒu)出現沉澱，若(ruò)出(chū)現沉(chén)澱，應於 75 °C 溫(wēn)浴加(jiā)熱至(zhì)沉(chén)澱(diàn)*溶(róng)解並冷
卻至室(shì)溫(wēn)後(hòu)再(zài)使用(yòng)。 
四(sì)，操(cāo)作步(bù)驟 
1. 用幹淨鋒利(lì)的(dí)刀片(piàn)從瓊脂糖凝膠中切下(xià)含(hán)有(yǒu)目(mù)的(dí) DNA 條(tiáo)帶的(dí)凝膠塊，用紙巾(jīn)吸盡凝膠(jiāo)表(biǎo)麵液 
體並切碎。計(jì)算凝(níng)膠重量，該(gāi)重量(liáng)作為一(yī)個(gè)凝(níng)膠體積（如(rú) 100 mg=100 μl 體(tǐ)積(jī)），然後依次放(fàng)入(rù) 96孔(kǒng) 2.2 ml深孔(kǒng)板(bǎn)（試劑(jì)盒內提(tí)供）孔中(zhōng)。 
 * 觀(guān)察DNA條帶(dài)位置時，請盡(jìn)可能(néng)縮短(duǎn)紫外照(zhào)射時(shí)間，以(yǐ)減(jiǎn)少紫外(wài)誘(yòu)導突(tū)變。電泳時間(jiān)可適當(dāng)延(yán)長，從而使(shǐ)目的DNA條帶與其(qí)他(tā)DNA條帶盡可(kě)能(néng)分(fēn)開，從而(ér)提高(gāo)回收純度(dù)。 
 
2. 加入(rù) 3個(gè)凝膠體(tǐ)積(jī)的(dí) Buffer DE-A，用矽膠片(piàn)密封各(gè)孔（試(shì)劑盒內提(tí)供(gōng)），混合(hé)均(jūn)匀(yún)後於(yú) 75 °C溫(wēn)浴(yù)，間斷(duàn)混合(hé)（每 3-5 min），直至凝(níng)膠塊(kuài)*熔化（15 min左右）。3,000×g 簡短離(lí)心(xīn)使矽膠(jiāo)片(piàn)上的溶(róng)液到 96深孔板中。 
* 溫(wēn)浴(yù)及混(hùn)匀過(guò)程中，要確保(bǎo)矽膠(jiāo)片(piàn)與深孔(kǒng)板(bǎn)貼(tiē)緊，以免(miǎn)孔間(jiān)樣(yàng)品(pǐn)汙(wū)染(rǎn)。 
* Buffer DE-A為(wéi)紅(hóng)色(sè)溶液。在熔化(huà)凝膠的過(guò)程中(zhōng)，可以(yǐ)幫助觀(guān)察(chá)凝膠是(shì)否*熔化。 
 
3. 棄(qì)矽膠(jiāo)片。每孔加 0.5個(gè) Buffer DE-A體(tǐ)積的(dí) Buffer DE-B，用不幹膠片(piàn)（試劑(jì)盒內提(tí)供(gōng)）密封各孔，混合均匀(yún)。3,000×g 簡短離(lí)心使不(bù)幹膠片上的溶液(yè)到(dào) 96深孔板中。當(dāng)分離(lí)的DNA 條(tiáo)帶小(xiǎo)於
400 bp 時，應(yīng)在此(cǐ)溶液中再加(jiā)入(rù) 1個凝膠(jiāo)體(tǐ)積(jī)的(dí)異丙(bǐng)醇。 
* 加Buffer DE-B 後(hòu)混(hùn)合(hé)物顏色(sè)變為黃(huáng)色(sè)，充(chōng)分(fēn)混匀以保證形(xíng)成(chéng)均一的(dí)黃色溶(róng)液。 
 
4. 將 96孔(kǒng) DNA 製(zhì)備(bèi)板(bǎn)（試(shì)劑盒內提供）置於(yú)新的(dí)96孔(kǒng) 2.2 ml 深(shēn)孔(kǒng)板（試劑盒(hé)內(nèi)提(tí)供(gōng)）上，然(rán)後將樣品轉(zhuǎn)移至 96孔 DNA製備板(bǎn)中(zhōng)，用不(bù)幹膠片密(mì)封(fēng)各孔(kǒng)，3,000×g 離心 5 min，棄濾(lǜ)液。 
 
5. 將(jiāng) 96孔 DNA 製(zhì)備(bèi)板(bǎn)置回深(shēn)孔(kǒng)板(bǎn)上(shàng)，每(měi)孔(kǒng)加800 ml Buffer W2，3,000×g 離心(xīn) 1 min，棄濾(lǜ)液(yè)；以(yǐ)同樣的方法，再用(yòng) 800 ml Buffer W2洗(xǐ)滌一(yī)次，3,000×g 離心(xīn) 1 min。 
 * 確認在(zài)Buffer W2 concentrate中已(yǐ)按(àn)試劑(jì)瓶(píng)上的(dí)體積加入(rù)無(wú)水(shuǐ)乙(yǐ)醇(chún)。 
* 兩次用(yòng)Buffer W2衝洗能確保鹽分被*清除(chú)，消除對(duì)後續反應的(dí)影響(xiǎng)。 
 
6. 將 96孔DNA製備板置回 96孔 2.2ml 深(shēn)孔板上(shàng)，3,000×g 離(lí)心 5 min。 
7. 將(jiāng)96孔DNA製備板(bǎn)置於(yú)潔淨(jìng)的(dí)96孔(kǒng)V型底(dǐ)板（試劑盒內(nèi)提供(gōng)）上，在膜正中央加(jiā)50 ml Eluent或(huò)去
離(lí)子水(shuǐ)，用(yòng)不(bù)幹膠片密封各(gè)孔，室(shì)溫靜置 5 min。3,000×g 室(shì)溫(wēn)離心 5 min洗(xǐ)脫(tuō)DNA。 
* 將(jiāng)Eluent或(huò)去(qù)離子(zǐ)水(shuǐ)加熱(rè)至(zhì)65℃，可(kě)提高(gāo)洗脫效率。