ELISA四種檢測法(fǎ)優(yōu)缺點(diǎn)比較

 　　ELISA四種檢(jiǎn)測(cè)法優(yōu)缺點比較(jiào) 
　　ELISA檢(jiǎn)測是一種(zhǒng)廣泛(fàn)應用(yòng)在測(cè)定(dìng)液(yè)體樣本(běn)中(zhōng)的(dí)蛋白(bái)，抗(kàng)體(tǐ)，或激(jī)素(sù)的免疫剖(pōu)析技(jì)術。酶聯(lián)免疫吸附(fù)實驗(yàn)的(dí)規範程序，通常是把蛋白(bái)，抗(kàng)體，或激(jī)素等（即(jí)抗原）直(zhí)接(jiē)或是以(yǐ)捕(bǔ)捉(zhuō)抗體（capture Ab）固定在固相載體(tǐ)上，再參(cān)加一(yī)級(jí)檢測抗(kàng)體（primarydetection Ab），構成一(yī)個抗原抗(kàng)體(tǐ)的復(fù)合物。若是(shì)該(gāi)抗(kàng)體現(xiàn)已用(yòng)酶（enzyme）符號了(liǎo)，即可用(yòng)來直接測(cè)定抗原的量，若無，則(zé)可運用另(lìng)一個(gè)酶符號(hào)的二級(jí)抗(kàng)體(tǐ)來測定(dìng)抗原的量。測定抗原量的辦法是參加該酶的底(dǐ)質（substrate），作用後(hòu)發作呈(chéng)現(xiàn)的色(sè)彩深(shēn)淺和樣本(běn)中(zhōng)的抗(kàng)原(yuán)量呈正比的(dí)，依此(cǐ)原理(lǐ)計算出(chū)樣本(běn)中的抗原總量或濃度。
　　1.直(zhí)接法(fǎ)（direct ELISA）
　　將抗原直接固定在固(gù)相載體(tǐ)上，參加酶(méi)符(fú)號的(dí)一級(jí)抗體，即可測定(dìng)抗(kàng)原總量(liáng)，此一(yī)級(jí)抗(kàng)體的(dí)特異性非常(cháng)重(zhòng)要。
　　優勢
：操(cāo)作手續(xù)簡(jiǎn)略，因無須運(yùn)用二抗可防止(zhǐ)交互(hù)反響(xiǎng)。
　　缺(quē)陷
：實驗中(zhōng)的一(yī)抗都(dū)得用(yòng)酶(méi)符號，但不是(shì)每種抗(kàng)體都適合(hé)做(zuò)符號，費(fèi)用相(xiāng)對進步。
　　2.間接(jiē)法（indirect ELISA）
　　此測定辦法(fǎ)與直接(jiē)法相(xiāng)似，不一(yī)樣(yàng)在於一(yī)級(jí)抗(kàng)體沒有酶符號，改(gǎi)用(yòng)酶符(fú)號的二(èr)級抗體去(qù)辨(biàn)識(shí)一(yī)級抗體來(lái)測(cè)定抗原量。
　　優(yōu)勢
：二(èr)抗能夠加強信(xìn)號(hào)，並且(qiě)有多(duō)種(zhǒng)挑(tiāo)選(xuǎn)能做不(bù)一(yī)樣的(dí)測定(dìng)剖(pōu)析(xī)。不加酶符號的一級(jí)抗體則能保存它(tā)zui多的免疫(yì)反響性。
　　缺陷
：交互(hù)反響(xiǎng)發(fā)作的機(jī)率(shuài)較(jiào)高。
　　3.雙抗體(tǐ)夾心法(fǎ)（sandwich ELISA）
　　被檢測的(dí)抗原包(bāo)被在(zài)兩(liǎng)個抗體之間，其(qí)間(jiān)一個抗體將抗原(yuán)固定(dìng)於固(gù)相載(zǎi)體上，即(jí)捕捉(zhuō)抗(kàng)體。另(lìng)一個(gè)則(zé)是(shì)檢(jiǎn)測抗體，此抗體可用酶符號後直(zhí)接測(cè)定(dìng)抗原(yuán)的量；或不符號(hào)，再(zài)透過酶(méi)符(fú)號的(dí)二(èr)級抗(kàng)體來測定(dìng)抗(kàng)原的量。這(zhè)兩種(zhǒng)抗(kàng)體(tǐ)有(yǒu)必(bì)要(yào)當心選擇，才可防(fáng)止交(jiāo)互反響(xiǎng)或競爭(zhēng)一(yī)樣(yàng)的抗(kàng)原(yuán)部(bù)位(wèi)。
　　優勢(shì)
：高(gāo)活絡(luò)，高(gāo)專一(yī)性，抗原無須事前(qián)純(chún)化。
　　缺陷(xiàn)
：抗原(yuán)必定(dìng)得(dé)具有(yǒu)兩個以(yǐ)上(shàng)的抗體部(bù)位。
　　4.競(jìng)爭(zhēng)法(fǎ)（competitive ELISA）
　　樣本裏的抗原(yuán)（自(zì)在抗(kàng)原）和純(chún)化並(bìng)固定在(zài)固相載體(tǐ)上的(dí)抗原（固(gù)定(dìng)抗(kàng)原）一同競爭(zhēng)一(yī)樣的抗(kàng)體，當(dāng)樣(yàng)品(pǐn)裏的自(zì)在(zài)抗原越多，就(jiù)能夠越(yuè)多的(dí)抗體(tǐ)，而固定抗原就(jiù)隻能到較少的(dí)抗體(tǐ)，反之(zhī)亦(yì)然。經清(qīng)潔(jié)過程(chéng)，洗(xǐ)去自在抗原和抗體(tǐ)的復(fù)合物(wù)，隻留(liú)下固定抗(kàng)原和抗(kàng)體(tǐ)的復合(hé)物，拿(ná)來(lái)與隻要固(gù)定抗(kàng)原的對(duì)照組(zǔ)成果相(xiāng)比擬，依(yī)據(jù)呈色區別就可計(jì)算(suàn)出樣品裏的抗(kàng)原含量。
　　優勢
：可(kě)適用(yòng)比(bǐ)擬不純的樣(yàng)本，並且數據(jù)再(zài)現性很高(gāo)。
　　缺陷(xiàn)
：全(quán)體(tǐ)的敏感性和專一性都(dū)較差(chà)。
　　ELISA技(jì)術
：
　　根據(jù)細胞(bāo)法(fǎ)（cell-based ELISA）
：
　　是一(yī)種(zhǒng)新(xīn)的(dí)定性蛋白檢測技(jì)術，將(jiāng)細胞直接在(zài)微(wēi)孔板裏培(péi)育(yù)，待檢測(cè)時，不需(xū)抽(chōu)提蛋(dàn)白和(hé)裂解(jiě)細胞，便(biàn)可直接(jiē)丈(zhàng)量(liáng)微(wēi)孔板裏(lǐ)蛋白經影響(xiǎng)或抑製作(zuò)用(yòng)後(hòu)的改變。
　　優(yōu)勢(shì)
：無(wú)需(xū)裂(liè)解(jiě)細(xì)胞，所以方(fāng)針蛋(dàn)白丟失zui少(shǎo)，可測定(dìng)完(wán)好細(xì)胞(bāo)，黏附(fù)細(xì)胞(bāo)，還有非粘(nián)附細胞(bāo)。
　　缺(quē)陷(xiàn)
：不能測(cè)定(dìng)抗原量。