ELISA檢(jiǎn)測6中常規樣(yàng)品(pǐn)的(dí)處(chǔ)理(lǐ)方法(fǎ)

 　　ELISA檢測6中常規(guī)樣(yàng)品(pǐn)的(dí)處(chǔ)理(lǐ)方(fāng)法(fǎ)
　　通常我們(mén)可用(yòng)於ELISA檢測的(dí)樣本(běn)是有多(duō)種類型(xíng)的，如(rú)血清(qīng)，血(xiě)漿，尿(niào)液(yè)，細胞培養(yǎng)上清(qīng)或組織(zhī)匀漿液(yè)等，不同類型(xíng)的檢測樣本前期的處理(lǐ)方法(fǎ)是不(bù)一(yī)樣的(dí)。正(zhèng)確的處(chǔ)理(lǐ)樣本(běn)是保(bǎo)證ELISA檢測的正(zhèng)確性和準確性(xìng)的*步，下(xià)麵簡(jiǎn)單(dān)介紹(shào)一(yī)下不(bù)同類型的(dí)樣(yàng)本的(dí)處(chǔ)理方(fāng)法(fǎ)。
　　血清(qīng)
　　血(xiě)清是(shì)zui常用(yòng)於(yú)ELISA檢測的一(yī)類樣本，處(chǔ)理(lǐ)也比較(jiào)簡單(dān)。
　　用無(wú)熱(rè)原(yuán)，無內毒素(sù)的試管(guǎn)或離心(xīn)管采集血(xiě)液(yè)標(biāo)本(běn)，將試管或離(lí)心(xīn)管(guǎn)室溫放(fàng)置(zhì)2小(xiǎo)時或(huò)4℃過(guò)夜(yè)，使血清析出(chū)。（將試管或離(lí)心(xīn)管(guǎn)傾斜(xié)放置，使液(yè)麵橫截麵(miàn)增大，能使血清更(gēng)大程(chéng)度(dù)的析出(chū)。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔(zī)細收(shōu)集上清。建(jiàn)議將(jiāng)血(xiě)清分(fēn)裝(zhuāng)多(duō)份(fèn)，-20℃或(huò)-80℃保(bǎo)存(cún)，避免(miǎn)反復(fù)凍(dòng)融。
　　采血(xiě)過程中應(yīng)避(bì)免(miǎn)溶(róng)血(xiě)，因(yīn)為紅細胞裂(liè)解時會釋放具有(yǒu)過(guò)氧化(huà)酶(méi)活性的(dí)物(wù)質，在以HRP為(wéi)標記(jì)的ELISA檢測中(zhōng)會有非特異(yì)性(xìng)的(dí)顯(xiǎn)色，而導致檢測的不準(zhǔn)確性。同(tóng)時(shí)也(yě)應避免細菌汙染(rǎn)，因為菌體內可(kě)能(néng)含有(yǒu)內源(yuán)性的HRP從而導(dǎo)致(zhì)檢(jiǎn)測的(dí)假陽(yáng)性(xìng)。
　　血漿
　　用含(hán)抗(kàng)凝(níng)劑的(dí)采(cǎi)血管或離心管(guǎn)采集血(xiě)液標本，標本(běn)采集(jí)後(hòu)30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取(qǔ)上(shàng)清(qīng)即血漿。將上清(qīng)分裝多(duō)份，-20℃或-80℃保(bǎo)存，避(bì)免(miǎn)反復凍(dòng)融(róng)。避免使用溶血或高血脂的(dí)標本。
　　常(cháng)用的(dí)抗(kàng)凝(níng)劑(jì)為(wéi)EDTA，肝(gān)素鈉和枸櫞(yuán)酸(suān)鈉等，檢測(cè)時還應仔(zī)細閱(yuè)讀試劑盒說明(míng)書，檢查試(shì)劑盒是(shì)否對抗凝劑有特殊要(yào)求。
　　細胞(bāo)培養(yǎng)上(shàng)清
　　取細胞培養上清到(dào)離心管，1000×g離心20min，除(chú)去細胞碎(suì)片(piàn)及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保(bǎo)存，避免反(fǎn)復(fù)凍融。
　　細(xì)胞裂解液
　　1）吸去培養板(bǎn)內的(dí)培養基，用胰酶(méi)消化(huà)細(xì)胞(bāo)，加適量(liáng)培養(yǎng)基(jī)將細(xì)胞(bāo)從培養(yǎng)板(bǎn)上(shàng)吹(chuī)下來(lái)。懸浮細胞(bāo)可省略(lüè)。
　　2）收集(jí)細胞(bāo)懸(xuán)液，1000×g離心(xīn)10min，棄(qì)去(qù)培養基，用預(yù)冷的PBS潤洗(xǐ)3次(cì)。
　　3）加入(rù)適(shì)量的(dí)預冷(lěng)PBS或(huò)細胞裂解(jiě)液（臨用前(qián)加(jiā)入蛋(dàn)白酶抑(yì)製劑(jì)）重懸細(xì)胞。通常6孔板(bǎn)一(yī)個孔的細胞量需(xū)要150~250μL PBS重懸(xuán)。
　　4）將樣(yàng)品放入(rù)-20℃或-80℃，使樣(yàng)品冷凍，再(zài)放室溫(wēn)解(jiě)凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使(shǐ)細胞充分裂解(jiě)。也可將樣品(pǐn)進行(háng)超聲(shēng)破(pò)碎，以(yǐ)達(dá)到裂解的(dí)目的。
　　5）4℃ 10000×g 離(lí)心(xīn)10min，除去(qù)細胞(bāo)碎(suì)片，取(qǔ)上清(qīng)，-20℃或-80℃保存，避免(miǎn)反復凍融。
　　組(zǔ)織(zhī)匀漿液
　　1）將組織樣本(běn)用PBS (0.01M, PH 7.4) 衝洗，洗去(qù)組織表麵(miàn)殘(cán)留(liú)的血液或(huò)雜(zá)質。
　　2）將組織塊稱(chēng)重，記錄後(hòu)剪碎(suì)，碎(suì)塊(kuài)應盡量小(xiǎo)，便於(yú)匀漿得更充(chōng)分
　　3）將組織按一定的比例(lì)加入(rù)預冷(lěng)的(dí)PBS（臨(lín)用前加(jiā)入(rù)蛋(dàn)白酶(méi)抑製劑）匀漿(jiāng)，匀漿(jiāng)時置於冰上(shàng)或冰浴(yù)中。（通常(cháng)按(àn)組(zǔ)織重量：PBS體積(jī)=1:9的(dí)比例匀漿(jiāng)，例如1g的組織樣(yàng)本(běn)對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具(jù)體體積可(kě)根據(jù)實驗需(xū)要適(shì)當調(tiáo)整，檢(jiǎn)測後計算樣(yàng)品濃(nóng)度(dù)時應乘以相(xiāng)應(yīng)的稀釋(shì)倍(bèi)數(shù)）
　　4）吸(xī)取匀(yún)漿液(yè)到離(lí)心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取(qǔ)上清(qīng)，-20℃或-80℃保(bǎo)存，避免反復凍融。
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　　尿液，唾液等(děng)其他液體(tǐ)生(shēng)物樣本(běn)
　　1000×g離(lí)心20min，取(qǔ)上清即(jí)可(kě)檢(jiǎn)測。
　　總(zǒng)的來說，因為(wéi)ELISA隻能檢(jiǎn)測(cè)可溶(róng)性蛋(dàn)白(bái)的(dí)含(hán)量，所以(yǐ)應保(bǎo)證所有樣(yàng)本均(jūn)為澄(chéng)清的液體，沉澱(diàn)或(huò)懸浮物(wù)都應離心(xīn)去除(chú)。