PCR檢測常見問題之假(jiǎ)陽性(xìng)分(fēn)析(xī)

 　　PCR檢(jiǎn)測常(cháng)見問題之假(jiǎ)陽性(xìng)分析(xī)
　　利(lì)用PCR方法檢(jiǎn)測轉基(jī)因(yīn)成分時
，經常出現(xiàn)假(jiǎ)陽(yáng)性，假陰性(xìng)，非特(tè)異性(xìng)擴增和塗(tú)抹帶。尤其(qí)是假陽性和假陰性(xìng)可(kě)使檢測結(jié)果(guǒ)得出(chū)錯(cuò)誤結論
，有時可造(zào)成嚴重(zhòng)後(hòu)果(guǒ)。為(wéi)了提高(gāo)轉(zhuǎn)基因(yīn)檢測的(dí)準確性和(hé)可(kě)靠性
，PCR檢(jiǎn)測(cè)應盡量(liáng)減(jiǎn)少假陽(yáng)性，假陰(yīn)性，非特(tè)異(yì)性擴(kuò)增和(hé)塗(tú)抹帶現象的(dí)發生。一個好(hǎo)的(dí)PCR方(fāng)法(fǎ)不但(dàn)要求特異性好，靈敏(mǐn)度高，還要求具(jù)有(yǒu)高(gāo)的(dí)可重(zhòng)復(fù)性，重現性，魯棒性
，盡量(liáng)減(jiǎn)少(shǎo)假(jiǎ)陽性，假(jiǎ)陰(yīn)性(xìng)和(hé)非特(tè)異(yì)性(xìng)擴增(zēng)。
　　本文對PCR檢測(cè)中(zhōng)出現的假(jiǎ)陽(yáng)性(xìng)原(yuán)因進行(háng)分析(xī)
　　（一）假陽性現(xiàn)象
　　假陽(yáng)性是(shì)指檢測陰(yīn)性材料得到(dào)陽性結果(guǒ)。如(rú)果(guǒ)一次實驗中(zhōng)的(dí)幾個陰(yīn)性對照中出(chū)現(xiàn)一個或幾個(gè)陽性(xìng)結(jié)果
，提(tí)示(shì)本次實驗中其它標本的(dí)檢測結(jié)果(guǒ)可(kě)能有假陽性。實驗(yàn)中設立(lì)的陰(yīn)性對(duì)照可提(tí)示有(yǒu)無假(jiǎ)陽性結果(guǒ)出(chū)現。
　　（二(èr)）造(zào)成假(jiǎ)陽性(xìng)的(dí)原因
　　1. 樣品(pǐn)間(jiān)交叉汙染：樣(yàng)本汙(wū)染(rǎn)主要有收集樣(yàng)本的容器被汙(wū)染(rǎn)
，或(huò)樣(yàng)本放置(zhì)時
，由於密封不嚴(yán)溢(yì)於容(róng)器(qì)外
，或容器(qì)外(wài)粘(nián)有(yǒu)樣本而造成相(xiāng)互間交叉汙染；樣(yàng)本核酸模(mó)板在提(tí)取(qǔ)過程中(zhōng)
，由(yóu)於(yú)吸樣(yàng)槍汙(wū)染導致(zhì)標本間(jiān)汙染(rǎn)；
　　2. PCR試劑的(dí)汙(wū)染：主要是由於在PCR試劑(jì)配製過程中(zhōng)
，由於加(jiā)樣(yàng)槍(qiāng)，容器(qì)，雙(shuāng)蒸(zhēng)水(shuǐ)及其它溶液被PCR核(hé)酸模板(bǎn)汙(wū)染。
　　3. PCR擴增產(chǎn)物汙染(rǎn)：這(zhè)是PCR反(fǎn)應中(zhōng)zui主要zui常(cháng)見的(dí)汙染問題。因(yīn)為(wéi)PCR產物(wù)拷貝量大(dà)(一般為(wéi)1013拷貝(bèi)/ml)
，遠遠(yuǎn)高於(yú)PCR檢測(cè)數(shù)個拷(kǎo)貝的極限(xiàn)
，所(suǒ)以極(jí)微量的(dí)PCR產物汙染(rǎn)
，就(jiù)可(kě)形成假(jiǎ)陽(yáng)性。
　　4. 氣溶膠汙染：在空(kōng)氣(qì)與液(yè)體麵摩 擦(cā)時就可(kě)形成氣(qì)溶膠
，在操作(zuò)時(shí)比(bǐ)較劇(jù)烈(liè)地搖動(dòng)反(fǎn)應管
，開(kāi)蓋(gài)時，吸樣時(shí)及(jí)汙(wū)染進(jìn)樣(yàng)槍的反復吸樣都可(kě)形(xíng)成氣溶膠(jiāo)而汙染。據(jù)計算一個(gè)氣溶膠顆粒(lì)可含(hán)48000拷(kǎo)貝
，因(yīn)而(ér)由(yóu)其(qí)造(zào)成的汙染(rǎn)是一個值(zhí)得特別重(zhòng)視的問題(tí)。
　　5. 實驗室中克(kè)隆質(zhì)粒的汙(wū)染(rǎn)：由(yóu)於(yú)克隆質粒在(zài)單位容積內含量相當(dāng)高(gāo)
，另外(wài)在(zài)純(chún)化過程(chéng)中需(xū)用較多(duō)的(dí)用(yòng)具(jù)及試(shì)劑
，而且(qiě)在(zài)活細(xì)胞(bāo)內(nèi)的(dí)質粒
，由於活細(xì)胞的生長(cháng)繁殖的簡便性(xìng)及具(jù)有很強的(dí)生命力
，其汙(wū)染可能性也(yě)很大。在分子生物學(xué)實(shí)驗室(shì)及某些(xiē)用克隆質(zhì)粒做(zuò)陽性(xìng)對(duì)照(zhào)的(dí)檢(jiǎn)驗室
，這個問(wèn)題(tí)比較常見(jiàn)。