上(shàng)海(hǎi)熒(yíng)光定(dìng)量PCR檢測(cè)的(dí)方(fāng)法
：

　　熒光定量PCR所使用(yòng)的熒光(guāng)化(huà)學可分(fēn)為(wéi)兩種(zhǒng)
：熒光(guāng)探(tàn)針和熒光(guāng)染(rǎn)料
。而(ér)熒(yíng)光定(dìng)量 PCR 的方法(fǎ)相(xiāng)應的(dí)可(kě)分為(wéi)特異類(lèi)和非特異類兩類
，特(tè)異(yì)性檢(jiǎn)測方法是(shì)在PCR反應中(zhōng)利(lì)用標記(jì)熒(yíng)光(guāng)染料的(dí)基因(yīn)特(tè)異(yì)寡(guǎ)核(hé)苷(gān)酸探針來檢(jiǎn)測產物
；而(ér)非特(tè)異性檢測(cè)方法是在(zài)在PCR反(fǎn)應(yīng)體係中
，加(jiā)入(rù)過(guò)量熒光染(rǎn)料(liào)
，熒(yíng)光染料(liào)特異(yì)性(xìng)地摻入(rù)DNA雙(shuāng)鏈後
，發(fā)射出(chū)熒光信號
。前(qián)者由(yóu)於增加了探針的(dí)識別步驟(zhòu)
，特異性更(gēng)高
，但後者(zhě)則簡(jiǎn)便(biàn)易行
。

上(shàng)海熒(yíng)光(guāng)定量(liáng)PCR檢測zui常用的(dí)方法是DNA結(jié)合(hé)染(rǎn)料SYBR GreenⅠ的(dí)非特(tè)異(yì)性方法和Taqman水解(jiě)探(tàn)針的(dí)特(tè)異(yì)性(xìng)方法
，在這裏主(zhǔ)要介(jiè)紹(shào)這2種(zhǒng)方(fāng)法
，其它方(fāng)法(fǎ)請(qǐng)參(cān)考其它熒光(guāng)定量PCR資料
。

　　1，非(fēi)特異性SYBR Green I染(rǎn)料(liào)法

　　SYBR Green I是(shì)一種(zhǒng)結(jié)合於所有dsDNA雙螺旋小溝(gōu)區(qū)域的具有(yǒu)綠色(sè)激(jī)發(fā)波長(cháng)的染料(liào)（結合(hé)示(shì)意圖）
，在遊(yóu)離狀態下(xià)
，SYBR Green I發出微弱的熒光
，但一(yī)旦與(yǔ)雙(shuāng)鏈DNA結合(hé)後
，熒(yíng)光大大增強(qiáng)（作用(yòng)機(jī)理(lǐ)圖(tú)）
。因此
，SYBR Green I的熒光信號強度與(yǔ)雙(shuāng)鏈(liàn)DNA的(dí)數量相(xiāng)關
，可以(yǐ)根據熒光信(xìn)號(hào)檢(jiǎn)測出(chū)PCR體(tǐ)係存(cún)在的雙鏈DNA數量
。

　　2，特(tè)異性Taqman水解(jiě)探(tàn)針法(fǎ)

　　Taqman熒光定(dìng)量技術是(shì)以(yǐ)Taqman熒光探針(zhēn)為(wéi)基(jī)礎
，Taqman熒光探(tàn)針(zhēn)為一(yī)寡核(hé)苷酸(suān)
，兩端分(fēn)別標記一個熒(yíng)光發射(shè)基(jī)團和(hé)一個熒光(guāng)淬滅(miè)基(jī)團
。探針(zhēn)完(wán)整(zhěng)時(shí)
，發射(shè)基團發射的(dí)熒(yíng)光信號(hào)被(bèi)淬(cuì)滅基團吸(xī)收
；

PCR擴增時
，Taq酶(méi)的(dí)5’－3’外(wài)切(qiē)酶(méi)活(huó)性將探(tàn)針酶切(qiē)降解
，使熒(yíng)光(guāng)發射基(jī)團和(hé)熒光淬滅(miè)基團分離
，從(cóng)而熒(yíng)光監(jiān)測(cè)係(xì)統可接收到(dào)熒光(guāng)信(xìn)號(hào)
，即每擴增一(yī)條(tiáo)DNA鏈
，就有一個熒光分子形成
，實現(xiàn)了(liǎo)熒光信號的(dí)累積(jī)與(yǔ)PCR產物形(xíng)成(chéng)*同步
。從而實(shí)現定量（如(rú)下圖）
。常(cháng)用的(dí)熒(yíng)光(guāng)基團(tuán)是FAM, TET, VIC, HEX
。