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Lentiviral 慢(màn)病(bìng)毒製備

簡要描(miáo)述(shù):慢病(bìng)毒(dú)是(shì)逆轉錄(lù)病毒(dú)的(dí)一種,具有逆(nì)轉錄(lù)病(bìng)毒的(dí)基(jī)本結(jié)構(gòu)和特性:整(zhěng)合(hé)入宿主細胞(bāo)基(jī)因(yīn)組,長期(qī)表(biǎo)達(dá),可(kě)用(yòng)於(yú)轉(zhuǎn)基因(yīn)動物製(zhì)備;但也有不同(tóng)於(yú)逆(nì)轉(zhuǎn)錄(lù)病(bìng)毒(dú)的(dí)組份和特性:比(bǐ)逆轉(zhuǎn)錄(lù)病(bìng)毒具有更(gēng)高的(dí)滴度,不僅可(kě)以感染分裂期(qī)細胞(bāo),更重(zhòng)要的,還能(néng)感染(rǎn)非分(fēn)裂(liè)期的(dí)細胞。利(lì)用(yòng)慢(màn)病(bìng)毒載體(tǐ),可(kě)以研(yán)究啟(qǐ)動(dòng)子(zǐ)的調控,過表達特定基因或(huò)沉默(mò)特定基因(yīn)。

  • 產品(pǐn)型號:
  • 廠商(shāng)性質:生產廠家(jiā)
  • 更新時(shí)間(jiān):2024-05-13
  • 訪  問(wèn)  量:3463

慢(màn)病(bìng)毒(dú)包裝服務(wù)

慢病毒(dú)簡介

    慢(màn)病毒(dú)是逆轉錄病(bìng)毒的一(yī)種(zhǒng),具有逆(nì)轉(zhuǎn)錄病毒的(dí)基本結構(gòu)和(hé)特性:整(zhěng)合入(rù)宿主細胞基因(yīn)組,長(cháng)期表達(dá),可用於轉基因動(dòng)物製備(bèi);但(dàn)也(yě)有不(bù)同於逆轉錄(lù)病毒的組份和(hé)特性:比逆轉(zhuǎn)錄(lù)病毒具有(yǒu)更(gēng)高的(dí)滴度(dù),不僅可(kě)以感染分裂(liè)期(qī)細胞,更重要的,還能(néng)感(gǎn)染非(fēi)分(fēn)裂期的細(xì)胞。利(lì)用慢病(bìng)毒(dú)載(zǎi)體(tǐ),可以(yǐ)研究(jiū)啟動子(zǐ)的(dí)調控(kòng),過表(biǎo)達特定(dìng)基(jī)因(yīn)或沉默特定(dìng)基(jī)因。

慢病(bìng)毒(dú)包裝技術(shù)特點

病毒表(biǎo)達係(xì)統

腺病毒(dú)表達係統

慢病毒(dú)表(biǎo)達(dá)係(xì)統(tǒng)

病(bìng)毒(dú)基(jī)因組

雙(shuāng)鏈DNA病毒(dú)

RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒(dú)

自主(zhǔ)復(fù)製

不能

不(bù)能

是(shì)否整合

病(bìng)毒基因組遊離(lí)於宿主基因組(zǔ)外,瞬(shùn)時(shí)表達外(wài)源基(jī)因

病(bìng)毒基(jī)因組整合(hé)於宿(sù)主基因(yīn)組(zǔ),長(cháng)時間,穩(wěn)定(dìng)表(biǎo)達(dá)外(wài)源(yuán)基(jī)因(yīn)

感(gǎn)染細胞(bāo)類(lèi)型

感(gǎn)染(rǎn)絕(jué)大多(duō)數(shù)細(xì)胞(bāo),包括分裂(liè)期,非分裂(liè)期(qī)細(xì)胞(bāo)。

感(gǎn)染(rǎn)絕大(dà)多數(shù)細(xì)胞,包括分裂(liè)期,非分(fēn)裂期(qī)細胞。

表(biǎo)達豐度(dù)

高水平表(biǎo)達(dá)

中水平表(biǎo)達(dá)

表(biǎo)達時間

快(1-2 天)

慢(2-4 天)

滴度

滴度(dù)可達10E12pfu/mL

滴度(dù)可(kě)達(dá)10E9-10E10TU/mL

克隆容量(liáng)

可插(chā)入(rù)高達8kb的外源(yuán)片段,滴度隨插入(rù)片(piàn)段(duàn)長度增加而降低

可插入(rù)不超(chāo)過(guò)8kb的外源(yuán)片(piàn)段,滴(dī)度隨插入(rù)片段(duàn)長度(dù)增(zēng)加(jiā)而降(jiàng)低

免疫原(yuán)性(xìng)

高(gāo)免疫(yì)原性

低免(miǎn)疫原性(xìng)

RNAi

病(bìng)毒進入細胞(bāo)往(wǎng)往(wǎng)引(yǐn)起細胞(bāo)內(nèi)幹(gān)擾(rǎo)素反應,一般(bān)情況(kuàng)下(xià)不(bù)適(shì)合(hé)做(zuò)RNAi實驗

適(shì)合,是RNAi實驗的(dí)優選(xuǎn)工(gōng)具(jù)

基因過(guò)表達

包(bāo)裝容量(liáng)較大,可以(yǐ)滿(mǎn)足較大(dà)基因的包(bāo)裝,是(shì)過表達(dá)基因的優選(xuǎn)工具

包裝(zhuāng)容(róng)量有限,過表達的基因(yīn)過大時(shí),病(bìng)毒(dú)滴(dī)度受到影(yǐng)響(xiǎng)

過(guò)表(biǎo)達microRNA

適合

適(shì)合,是(shì)過(guò)表達microRNA實(shí)驗的(dí)優(yōu)選工(gōng)具(jù)

下調(tiáo)microRNA

有報道但不(bù)成(chéng)熟

有(yǒu)報道(dào)但不(bù)成熟

是(shì)否(fǒu)可(kě)以自行擴增

可以(yǐ)

需(xū)要特殊包裝係統和(hé)包裝環(huán)境

A. 慢(màn)病(bìng)毒載(zǎi)體的構(gòu)建:

根據不(bù)同的研究(jiū)需(xū)求構建(jiàn)慢病(bìng)毒載體(tǐ),如用於RNAi的(dí)慢病毒(dú)載(zǎi)體,用於基(jī)因過(guò)表(biǎo)達的(dí)慢病(bìng)毒載(zǎi)體,用於啟動(dòng)子活(huó)性研(yán)究的慢(màn)病(bìng)毒載體(tǐ)等(děng);

B. 慢(màn)病毒包(bāo)裝過程(chéng):

    將重組病(bìng)毒質(zhì)粒(lì)及其輔(fǔ)助包裝(zhuāng)質(zhì)粒共轉染至(zhì)包裝(zhuāng)細(xì)胞(bāo)中(zhōng),收集富(fù)含(hán)慢病(bìng)毒(dú)顆(kē)粒(lì)的細(xì)胞上清液(yè),對其濃縮後(hòu)得到高滴度(dù)的慢(màn)病(bìng)毒濃(nóng)縮(suō)液,在293T細胞中(zhōng)測(cè)定(dìng)並標(biāo)定病(bìng)毒滴度。

C. 慢病毒(dú)包裝結果(guǒ):

滴定(dìng)濃度(dù):1×107~1×108TU/ml

zui終(zhōng)體(tǐ)積:1 ml純化後的病毒液(儲存於PBS)

儲存(cún):批量儲存的*條(tiáo)件為(wéi)-80°C。

慢病毒包裝用(yòng)途:

慢病毒(dú)載體包裝之後(hòu)成為假病毒顆(kē)粒後(hòu),可(kě)用於:

· 感染(rǎn)原代細胞(bāo);

· 製備穩定(dìng)表達/沉(chén)默特定基因的單(dān)克隆細胞(bāo)株;

· in vivo的基因操(cāo)作;

· 轉(zhuǎn)基(jī)因(yīn)動(dòng)物(wù),特(tè)別是轉(zhuǎn)基因大鼠的(dí)製備(bèi)。

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