DNA CpG甲基化(huà)檢(jiǎn)測(cè)

甲基化(huà)特(tè)異性(xìng)的(dí)PCR（methylation-specific PCR）應(yīng)用

    DNA甲基(jī)化(huà)在人的正常發(fā)育(yù)，X染色體失活，衰(shuāi)老以(yǐ)及許(xǔ)多(duō)人(rén)類疾病(bìng)（如(rú)發(fā)育畸形，癌(ái)症，心血管(guǎn)疾病，糖尿(niào)病(bìng)和神經(jīng)心理失(shī)調等）過(guò)程中(zhōng)發(fā)揮重要(yào)作(zuò)用(yòng)，已經成為表(biǎo)觀遺傳(chuán)學和(hé)表觀(guān)基因組(zǔ)學(xué)的重要(yào)研(yán)究(jiū)內容。

    DNA甲基(jī)化是表(biǎo)觀遺傳修飾(shì)的主要(yào)方式(shì)，它不改(gǎi)變DNA的(dí)一級(jí)結(jié)構，卻在細胞的(dí)發(fā)育，基(jī)因的表(biǎo)達(dá)，及基(jī)因組(zǔ)的(dí)穩定(dìng)性中(zhōng)起(qǐ)著重要的(dí)作用(yòng)。CpG島的(dí)高甲基化(huà)是腫瘤(liú)中存(cún)在的普遍(biàn)現象，而啟(qǐ)動(dòng)子CpG島的(dí)高(gāo)甲(jiǎ)基化是(shì)除(chú)突(tū)變和缺(quē)失外(wài)腫瘤中(zhōng)抑癌(ái)基因(yīn)失(shī)活的第(dì)三種機(jī)製。

    因(yīn)此，基因(yīn)啟動(dòng)子(zǐ)甲(jiǎ)基化檢測(cè)在臨床診斷(duàn)（如甲基(jī)化(huà)檢測與低(dī)劑量CT相結(jié)合），藥物敏(mǐn)感(gǎn)性檢測(cè)等方麵具有(yǒu)很高的應用價值。

甲(jiǎ)基化特異(yì)性(xìng)PCR法原理(lǐ)（Methylation-specific PCR,MSP） 

    MSP法的(dí)原(yuán)理(lǐ)是(shì)基(jī)於DNA甲基(jī)轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷(gān)甲硫(liú)氨(ān)酸(suān)作為甲基(jī)供(gōng)體，將(jiāng)胞嘧(mì)啶轉(zhuǎn)變為5-甲基胞嘧啶（mC）的(dí)一種(zhǒng)反應，在真核(hé)生物DNA中，5-甲基(jī)胞嘧啶(dìng)是(shì)*存在的(dí)化(huà)學性(xìng)修(xiū)飾(shì)鹼(jiǎn)基。CG二(èr)核苷酸是zui主(zhǔ)要(yào)的甲(jiǎ)基化位點，它在基(jī)因(yīn)組(zǔ)中呈不(bù)均匀(yún)分布(bù)，存在高(gāo)甲(jiǎ)基(jī)化(huà)，低甲基(jī)化和非甲基(jī)化的(dí)區域，在哺乳動物中(zhōng)mC約占(zhān)C總量的(dí)2－7％。一般(bān)說來，DNA的(dí)甲基(jī)化(huà)會抑製(zhì)基因的(dí)表達；針對(duì)特定區(qū)域設計(jì)引物，再(zài)進行(háng)PCR擴(kuò)增，甲基化(huà)的位(wèi)點可以被當作一(yī)個C/T的SNP來處理；可(kě)利(lì)用(yòng)直接測序法來判斷是(shì)否(fǒu)CpG位點發(fā)生(shēng)甲基(jī)化。具(jù)有方便(biàn)快(kuài)捷(jié)，靈敏度高的優(yōu)點，是(shì)目(mù)前較為常用的甲(jiǎ)基化(huà)檢測方法(fǎ)。

 MSP實(shí)驗流程(chéng)
：

1.基(jī)因組DNA製備，樣(yàng)本(běn)類型(xíng)有
：組織，血(xiě)液(yè)，細(xì)胞(bāo)，毛發，唾液等。

2.經亞(yà)硫酸(suān)氫鈉處(chǔ)理後，未甲(jiǎ)基(jī)化的胞嘧啶發生(shēng)脫(tuō)氨(ān)基(jī)變(biàn)為(wéi)尿(niào)嘧(mì)啶(dìng)，而甲基化的胞(bāo)嘧啶則不變。

3.DNA修(xiū)飾(shì)後，進(jìn)行純(chún)化及(jí)回收(shōu)。 

4.修飾(shì)後的(dí)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

5.電泳(yǒng)或(huò)直接(jiē)測(cè)序(xù)檢(jiǎn)測(cè)

6.實驗報(bào)告(gào)（包括(kuò)MSP基因(yīn)組(zǔ)DNA，PCR產(chǎn)物(wù)及電泳(yǒng)照片）

樣(yàng)品要(yào)求
1，基因(yīn)組DNA（≥1µg），純度(dù)（OD
：1.9-2.0）
2，若提供(gōng)的材料(liào)為新鮮組(zǔ)織，血(xiě)液，細(xì)胞等生物(wù)材料，請(qǐng)提(tí)供(gōng)足夠提取1µg以上基因組DNA的(dí)材(cái)料量(liáng)。
3.樣本(běn)運(yùn)輸途中(zhōng)，需(xū)要加(jiā)冰袋(dài)，或幹(gān)冰(bīng)。