世界上個(gè)人源(yuán)的(dí)癌(ái)細(xì)胞(bāo)係(xì)建立(lì)於(yú)1952年(nián)。在(zài)以後(hòu)的(dí)實(shí)驗研究中(zhōng),研究人員發現(xiàn)許多(duō)培養的(dí)細(xì)胞已經(jīng)與(yǔ)原(yuán)始的(dí)細胞株的特(tè)征不同了(liǎo),可能某種(zhǒng)細胞培養的方法會導致細胞(bāo)發生(shēng)變化,或者(zhě)是交(jiāo)叉汙染。
基(jī)於STR的方法可以輕鬆(sōng),快速(sù)地(dì)鑒定(dìng)細胞(bāo)身(shēn)份
所有這(zhè)些(xiē)問題(tí)都(dū)可(kě)以通(tōng)過(guò)價(jià)格低廉的方(fāng)法(fǎ)來(lái)解(jiě)決,這(zhè)一(yī)方法目(mù)前被(bèi)用於(yú)鑒(jiàn)定細胞係的標(biāo)準(zhǔn)程(chéng)序(xù),但是(shì)這一鑒定(dìng)過(guò)程(chéng)必須要(yào)進行。 Roderick MacLeod 及其(qí)同事(shì)在(zài)DSMZ發(fā)現(xiàn)約有90%的(dí)科學家在(zài)提交新(xīn)細胞(bāo)係(xì)時,忽視或(huò)拒絕(jué)細胞(bāo)庫的要求(qiú),他(tā)們抵觸建立細(xì)胞係(xì)DNA指紋(wén)圖(tú)譜(pǔ)以(yǐ)備(bèi)將來鑒定細(xì)胞係使(shǐ)用(yòng)(5,7)。研究人員需(xū)要(yào)在(zài)他(tā)們從事(shì)研究(jiū)的早期就接受教(jiào)育,知(zhī)道如何(hé)檢測種係內和(hé)種(zhǒng)係間的交叉汙(wū)染(rǎn),並了(liǎo)解為(wéi)什(shí)麼(mó)這(zhè)樣做(zuò)會如(rú)此(cǐ)重要(yào)。
在細(xì)胞培(péi)養中(zhōng)可(kě)以使用許(xǔ)多(duō)方法(fǎ)對(duì)交(jiāo)叉汙染進行鑒(jiàn)定,如同功酶分析(xī),染色體組分型,人(rén)淋巴細胞抗原(yuán)(HLA)分型和(hé)擴(kuò)增(zēng)片段長(cháng)度多態性(AFLP)的特(tè)征分(fēn)析。但是(shì),比(bǐ)較好的方法(fǎ)是STR圖譜法(fǎ),此方(fāng)法是在(zài)以DNA為基礎的法醫鑒定領(lǐng)域(yù)成功(gōng)建(jiàn)立起來的。在(zài)ATCC,STR分析使用的(dí)是(shì)多(duō)重(zhòng)PCR係統),可以同(tóng)時(shí)擴增多個(gè)STR位點(diǎn)加(jiā)1個(gè)性別決定位點(diǎn)Amelogenin(10,11)。每(měi)個(gè)被(bèi)分(fēn)析的人源細胞(bāo)係都(dū)有(yǒu)其*的DNA重(zhòng)復(fù)模(mó)式(shì),因此通(tōng)過與(yǔ)基礎(chǔ)圖(tú)譜進(jìn)行比對,即可(kě)對(duì)每(měi)一(yī)批(pī)新細胞係(xì)的身份進(jìn)行確證。STR方(fāng)法防(fáng)止(zhǐ)了(liǎo)ATCC將其6個(gè)"錯(cuò)誤(wù)"細胞係進一步(bù)傳播出(chū)去 - 因為(wéi)經過(guò)STR分型(xíng)後,發現原本來自(zì)女性(xìng)的(dí)細胞係中存在(zài)著Y染(rǎn)色(sè)體特(tè)異的擴(kuò)增(zēng)產(chǎn)物(wù)。此(cǐ)研究團體希(xī)望(wàng)STR圖(tú)譜(pǔ)技(jì)術能(néng)夠作為(wéi)範圍(wéi)的檢測並消(xiāo)除細胞係汙染的(dí)參(cān)考(kǎo)技術(shù)。
即使(shǐ)大多數科研人員所(suǒ)在的實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有進(jìn)行STR分型的(dí)設(shè)備,他們仍可(kě)通過(guò)具(jù)備(bèi)儀(yí)器(qì)(毛細管電泳(yǒng)),軟(ruǎn)件(jiàn)和經(jīng)驗的(dí)研(yán)究所中(zhōng)心實(shí)驗(yàn)室(shì)和專(zhuān)業(yè)服務(wù)公司來完成STR分型。 文獻(xiàn)中(zhōng),通(tōng)常建議研(yán)究人員在培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)的較(jiào)早階段(duàn)(細胞培養周)來鑒定細(xì)胞係的(dí)身份。細胞在被(bèi)凍(dòng)存前應(yīng)再一次進(jìn)行鑒(jiàn)定;對於(yú)活(huó)躍(yuè)生(shēng)長(cháng)的細(xì)胞,每(měi)兩(liǎng)個月應鑒(jiàn)定(dìng)一(yī)次;文獻(xiàn)發(fā)表前也應對(duì)細胞係身(shēn)份(fèn)進行鑒(jiàn)定(dìng)。如果(guǒ)一(yī)個實驗(yàn)室使(shǐ)用不(bù)止一(yī)種細胞(bāo)係(xì),則(zé)應在(zài)實驗(yàn)開始時,就要(yào)對(duì)所(suǒ)有的(dí)細胞係進行鑒(jiàn)定,以便排除交叉(chā)汙(wū)染(rǎn)(8)。
總結
由於細(xì)胞(bāo)培(péi)養體(tǐ)係在生物藥物的(dí)研究(jiū)和技術(shù)發展(zhǎn)中(zhōng)非常(cháng)重要(yào),適當(dāng)的細(xì)胞(bāo)係鑒(jiàn)定(dìng)過程(chéng)即成(chéng)為(wéi)每(měi)個研究(jiū)人(rén)員的大(dà)興趣點(diǎn)。然而,交(jiāo)叉汙(wū)染的問題仍(réng)然存在。隨著(zhuó)世界範圍內實驗(yàn)室使用(yòng)新細(xì)胞係的(dí)數量增(zēng)多(duō)和(hé)頻率增加(jiā),在(zài)質(zhì)量(liáng)控製(zhì)(如:細胞(bāo)係(xì)鑒定(dìng))的基本原則(zé)上(shàng)產生(shēng)了(liǎo)巨(jù)大(dà)的差(chà)別(bié)。從已(yǐ)經發表的(dí),使(shǐ)用(yòng)"錯誤"的(dí)細胞(bāo)係(xì)而導致(zhì)可(kě)疑性結(jié)果的研究論(lùn)文,到用於臨床的(dí)幹細(xì)胞(bāo)係和其它細胞(bāo)係(xì),交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染影響到了(liǎo)科(kē)學(xué)研究的每個領(lǐng)域-從實(shí)驗台到臨(lín)床(chuáng)。如果(guǒ)在細(xì)胞培(péi)養(yǎng)的處(chǔ)理(lǐ)和(hé)操(cāo)作中(zhōng)不進行重大(dà)變(biàn)革,那(nà)麼交叉汙(wū)染將(jiāng)會成(chéng)為(wéi)一個更(gēng)大,更(gēng)嚴重(zhòng)的(dí)問(wèn)題。
細胞培養體係(xì)在(zài)生物(wù)研究和藥(yào)物研究發展中(zhōng)非(fēi)常重要,隨著研究的(dí)深(shēn)入,細胞(bāo)係(xì)的(dí)種類也(yě)逐漸(jiàn)增多(duō),而細(xì)胞(bāo)係的(dí)交叉(chā)汙染仍然(rán)存在(zài)。交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)給實(shí)驗(yàn)研(yán)究帶(dài)來(lái)了(liǎo)很(hěn)嚴重(zhòng)的問題(tí),如果(guǒ)使(shǐ)用了錯誤的(dí)細胞(bāo)係使研(yán)究的結(jié)果(guǒ)遭到(dào)質(zhì)疑,前(qián)期的實驗可能(néng)都要(yào)重新(xīn)來(lái)做。因(yīn)此(cǐ)對細胞係的認證是有必要(yào)的。