你對(duì)熒光(guāng)定(dìng)量PCR了(liǎo)解(jiě)了多少

 　　提到PCR，相信在實(shí)驗室待過的同(tóng)學(xué)並(bìng)不(bù)會很(hěn)陌(mò)生，這個由美國(guó)科(kē)學(xué)家(jiā)Mullis在(zài)1985年(nián)發明的聚合酶鏈反(fǎn)應，至(zhì)今(jīn)在世界(jiè)範圍(wéi)內(nèi)都有(yǒu)廣泛(fàn)的應用(yòng)，作為(wéi)生物學(xué)實(shí)驗的(dí)一個(gè)重(zhòng)要的方法，其有(yǒu)著不可估量(liáng)的(dí)作用
。
　　什麼(mó)是熒光(guāng)定量PCR
　　我們知道，DNA有著(zhuó)雙螺(luó)旋(xuán)結(jié)構(gòu)，當溫度(dù)達(dá)到95攝氏(shì)度時(shí)，雙(shuāng)鏈(liàn)的DNA會(huì)分解(jiě)成為單(dān)鏈狀態，而(ér)在溫度(dù)到達(dá)72攝(shè)氏度(dù)左(zuǒ)右時，DNA聚合(hé)酶會沿著(zhuó)磷(lín)酸(suān)到五碳(tàn)糖(táng)的方(fāng)向進行合(hé)成(chéng)
。聚(jù)合酶鏈反應PCR就(jiù)是(shì)通過不斷(duàn)地調(tiáo)節溫度，以數量(liáng)級的速(sù)度增(zēng)加DNA數量的(dí)方法
。
　　而(ér)實(shí)時熒(yíng)光定量PCR是(shì)指，在(zài)PCR反應體(tǐ)係中加(jiā)入(rù)熒(yíng)光(guāng)基團(tuán)，利用熒光信(xìn)號的變化(huà)實(shí)時監測PCR擴(kuò)增(zēng)反應中(zhōng)每(měi)一個循環(huán)擴增(zēng)產物(wù)量(liáng)的(dí)變化，通(tōng)過(guò)Ct值(zhí)和標準(zhǔn)曲綫(xiàn)的關係(xì)對起始模(mó)板進行(háng)定量(liáng)分析(xī)
。
　　實(shí)時熒(yíng)光(guāng)定(dìng)量(liáng)常用的(dí)熒光化學分(fēn)類有染料(liào)法和(hé)探針法
。其中(zhōng)，探(tàn)針法(fǎ)可以更加地對需要檢(jiǎn)測的DNA片段進行染色(sè)，一般情(qíng)況下，探針(zhēn)法的(dí)特異(yì)性更高(gāo)
。
　　熒(yíng)光(guāng)定量(liáng)PCR的價(jià)值(zhí)
　　事實(shí)上，大(dà)多數(shù)病毒在感(gǎn)染(rǎn)動物(wù)以後(hòu)，會在(zài)感染後(hòu)的7天(tiān)左右(yòu)產生(shēng)特(tè)異(yì)性抗(kàng)體(tǐ)
。此(cǐ)後，當(dāng)同(tóng)種病(bìng)毒(dú)再次入侵時，機體會迅(xùn)速的產生(shēng)高(gāo)水(shuǐ)平(píng)抗(kàng)體(tǐ)，以中和這(zhè)些病毒(dú)
。這個(gè)過程被稱為機(jī)體的(dí)特異性(xìng)免疫反應
。
　　依(yī)照(zhào)生物體(tǐ)的這(zhè)個特(tè)點(diǎn)，一般(bān)情況下(xià)，科學(xué)家(jiā)會(huì)采用PCR或酶(méi)標(biāo)進行實驗檢測(cè)
。但也(yě)有意外，比(bǐ)如目(mù)前(qián)國(guó)內較為流行且對(duì)養(yǎng)豬業造成(chéng)慘重損(sǔn)失的“非(fēi)洲(zhōu)豬(zhū)瘟(wēn)病(bìng)毒(dú)”，該病毒的自(zì)然宿(sù)主隻有(yǒu)家(jiā)豬(zhū)，野(yě)豬(zhū)，鈍(dùn)緣軟蜱，但除豬(zhū)隻本身(shēn)之(zhī)外，人，車，物(wù)，料，等環境中攜(xié)帶(dài)有非洲豬(zhū)瘟(wēn)病(bìng)毒都會造成非洲豬(zhū)瘟的傳播(bō)，進(jìn)而(ér)威脅到(dào)豬(zhū)群的安危
。
　　更為可(kě)怕的(dí)是，這種病(bìng)毒侵(qīn)入豬隻(zhī)體(tǐ)內後，豬隻(zhī)在(zài)產生抗(kàng)體之(zhī)前就會(huì)走(zǒu)向死(sǐ)亡，死(sǐ)亡(wáng)率高達(dá)90%~100%，自2018年(nián)非(fēi)洲(zhōu)豬瘟(wēn)進入中(zhōng)國以(yǐ)來，將近(jìn)一(yī)年時間，對(duì)我國畜(xù)牧(mù)業(yè)造(zào)成(chéng)了(liǎo)上百億(yì)的損失(shī)
。此(cǐ)時，由於酶標(biāo)法(fǎ)檢測的是(shì)動(dòng)物產生(shēng)抗(kàng)體(tǐ)後的感(gǎn)染(rǎn)情況，顯然(rán)，對待這種烈性(xìng)病(bìng)毒來(lái)言，其(qí)價值(zhí)遠(yuǎn)遠低(dī)於(yú)熒(yíng)光定(dìng)量PCR
。
　　熒(yíng)光定量(liáng)PCR有著高靈(líng)敏性，高(gāo)度(dù)，方(fāng)便省時等(děng)特點(diǎn)，他(tā)可(kě)以在(zài)短時間(jiān)內，將(jiāng)一個(gè)微量的特種(zhǒng)DNA擴(kuò)增(zēng)到一(yī)個足以監(jiān)測(cè)到的(dí)數(shù)量級(jí)
。由(yóu)於在(zài)體(tǐ)內達(dá)到(dào)一定數(shù)量(liáng)級會(huì)造(zào)成生物體死(sǐ)亡，這(zhè)相當於是(shì)在和動物(wù)體內的(dí)病(bìng)毒(dú)賽跑，以(yǐ)達(dá)早(zǎo)發現(xiàn)，早處(chǔ)理(lǐ)的(dí)效(xiào)果(guǒ)
。