熒光定量PCR技術服務(wù)-定(dìng)量

簡要描(miáo)述(shù)：實(shí)時熒光定量PCR技(jì)術(shù)於1996年由美(měi)國Applied Biosystems公(gōng)司(sī)推(tuī)出(chū)，由(yóu)於該(gāi)技術不僅實(shí)現了(liǎo)PCR從(cóng)定性到(dào)定(dìng)量的(dí)飛躍，而(ér)且(qiě)與(yǔ)常(cháng)規(guī)PCR相比，它具(jù)有特(tè)異(yì)性(xìng)更(gēng)強(qiáng)，有(yǒu)效解決(jué)PCR汙(wū)染問題，自(zì)動(dòng)化程度(dù)高等(děng)特點(diǎn)，目前已(yǐ)得到廣(guǎng)泛應(yīng)用。實(shí)時(shí)熒(yíng)光定量(liáng)PCR：在(zài)PCR反(fǎn)應(yīng)體係中加(jiā)入熒(yíng)光(guāng)基(jī)團，利(lì)用(yòng)熒光(guāng)信(xìn)號積累實時(shí)監測整個PCR進程(chéng)，Z後(hòu)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)對未(wèi)知模板(bǎn)進行(háng)定量(liáng)分析(xī)的方(fāng)法。

產(chǎn)品(pǐn)型號(hào)：
廠商性(xìng)質(zhì)：生產廠家
更新(xīn)時(shí)間(jiān)：2024-05-13
訪問(wèn) 量(liáng)：5627

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產品(pǐn)介(jiè)紹(shào)：

定量(liáng)（Absolute Quantification，AQ）

分(fēn)析用(yòng)於(yú)確定未(wèi)知(zhī)樣(yàng)本中(zhōng)某(mǒu)個核酸(suān)序(xù)列的(dí)量(liáng)值(zhí)，即(jí)通常所說(shuō)的拷貝(bèi)數(shù)，應用(yòng)與病原體(tǐ)檢測，轉(zhuǎn)基因食(shí)品檢測(cè)，及(jí)基因表(biǎo)達(dá)研究。

SYBR Green特(tè)性：

（1）隻有和(hé)雙(shuāng)鏈(liàn)DNA結合後才發(fā)熒(yíng)光(guāng)。

（2）變性時，DNA雙(shuāng)鏈分開，無熒光(guāng)。

（3）在延伸結束(shù)階段(duàn)采集(jí)熒(yíng)光信號。

（4）SYBR Green也(yě)能(néng)和非特異(yì)性的(dí)雙(shuāng)鏈(liàn)DNA結(jié)合發(fā)光，所以必(bì)須在反應(yīng)結束時做熔解曲綫分析。

TaqMan探針的(dí)特(tè)性：

（1）5′端標記(jì)有(yǒu)報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM，VIC等

（2）3′端標記有(yǒu)熒(yíng)光(guāng)淬滅(miè)基(jī)團（Quencher, Q）

（3）探針完整(zhěng)，R所(suǒ)發(fā)射(shè)的熒光(guāng)能量被(bèi)Q基團(tuán)吸(xī)收，無熒光， R與(yǔ)Q分開(kāi)，發熒光（4）Taq酶(méi)有 5′→3′外(wài)切核酸酶活性，可(kě)水解探針(zhēn)。

定(dìng)量的(dí)標(biāo)準樣品：

（1）含(hán)有和待(dài)測(cè)樣品(pǐn)相(xiāng)同擴(kuò)增(zēng)片(piàn)段的克隆質粒

（2）含(hán)有(yǒu)和待測(cè)樣品(pǐn)相同(tóng)擴增片(piàn)段的cDNA

（3）PCR的產物(wù)，可(kě)分別(bié)做係(xì)列稀(xī)釋。

服(fú)務流程(chéng)：

步驟	客戶提供	服務內容	基(jī) 屹(yì) 提(tí) 供
1	新鮮(xiān)的(dí)且(qiě)盡量(liáng)多(duō)的(dí)材料；已知(zhī)的全長(cháng)基因序(xù)列(liè)；盡可能(néng)詳細的背景資(zī)料(liào)：DNA/ RNA來(lái)源，豐(fēng)度(dù)等(děng)。	DNA/RNA提(tí)取(qǔ)，根據基因(yīn)序列設計(jì)特異(yì)性的引物和熒光探針(zhēn)。
2	純(chún)化好的DNA/RNA（大(dà)於5 ug/樣品）；已(yǐ)知的全長(cháng)基(jī)因序列；盡(jìn)可能詳細的背(bèi)景資料：DNA/ RNA來(lái)源，豐度等。	根據基(jī)因序(xù)列設(shè)計特異(yì)性的引物和(hé)熒(yíng)光(guāng)探(tàn)針。
3		以DNA為(wéi)模板，對目(mù)的基因進行(háng)熒光(guāng)定量(liáng)PCR檢測(cè)分析	提(tí)供完整的定(dìng)量(liáng)分析(xī)結果(guǒ)，實驗熒光定量(liáng)擴增曲綫及(jí)詳(xiáng)細(xì)的實(shí)驗步驟。