DNA抽(chōu)提(tí)和(hé)純化(huà)方(fāng)法(fǎ)介(jiè)紹(shào)

     DNA抽提和純化方(fāng)法介(jiè)紹：
    一，酚(fēn)抽提法(fǎ)：先(xiān)用蛋(dàn)酶(méi)K，SDS破(pò)碎(suì)細(xì)胞，消化(huà)蛋(dàn)白，然(rán)後用(yòng)酚和酚-氯(lǜ)DNA大(dà)小為100-150kb二，甲酰胺(àn)解(jiě)聚(jù)法：破(pò)碎細(xì)胞同上，然(rán)後用(yòng)高濃度(dù)甲(jiǎ)酰胺(àn)解(jiě)聚蛋白(bái)質與DNA的結合(hé)，再(zài)透析獲(huò)得DNA可(kě)得DNA200kb左右。
    三，玻(bō)璃(lí)棒纏(chán)繞(rào)法(fǎ)：用鹽酸胍裂(liè)解(jiě)細胞，將裂(liè)解物(wù)鋪於乙(yǐ)醇(chún)上，然(rán)後用帶(dài)鉤或U型玻璃(lí)棒(bàng)在界(jiè)麵(miàn)輕攪，DAN沉(chén)澱液(yè)繞於玻棒。生(shēng)成DNA約80kb。
    四，異丙醇沉(chén)澱法(fǎ)：基(jī)本同1法，僅(jǐn)用二倍容(róng)積異(yì)丙醇(chún)替(tì)代(dài)乙醇，可去除小(xiǎo)分子RNA（在異丙(bǐng)醇中(zhōng)可溶(róng)狀(zhuàng)態(tài)）五(wǔ)，表(biǎo)麵(miàn)活性(xìng)劑快(kuài)速(sù)製備法：用Triton X-100A或NP40表麵(miàn)活(huó)性劑破(pò)碎細(xì)胞(bāo)，然(rán)後用蛋白(bái)酶K或(huò)酚(fēn)去(qù)除蛋(dàn)白，乙醇沉(chén)澱或透析。
    六(liù)，加(jiā)熱法快(kuài)速製(zhì)備(bèi)：加熱96℃-100℃，五分(fēn)鐘，然(rán)後離心(xīn)後取上清，可用(yòng)於PCR反(fǎn)應(yīng)。
    七，鹼變(biàn)性(xìng)快(kuài)速製備：先(xiān)用NaOH作(zuò)用20分鐘(zhōng)，再加HCI中(zhōng)和，離心後取(qǔ)上清，含少(shǎo)量DNA。
    DNA抽提(tí)和(hé)純化(huà)總的原(yuán)則：
    1，保證核酸(suān)一級(jí)結構的完整性；
    2，核(hé)酸樣(yàng)品中不(bù)應存(cún)在(zài)對酶有抑(yì)製(zhì)作(zuò)用(yòng)的(dí)有(yǒu)機溶(róng)劑(jì)和(hé)過高(gāo)濃(nóng)度的(dí)金屬(shǔ)離(lí)子；3，其他(tā)生物大(dà)分(fēn)子如(rú)蛋(dàn)白質，多糖(táng)和(hé)脂類(lèi)分子(zǐ)的(dí)汙(wū)染應(yīng)降低到zui低(dī)程度。