實(shí)時熒光(guāng)定(dìng)量PCR（Real Time Quantitative PCR）

在(zài)PCR反應體係中加入熒光(guāng)基(jī)團，利用熒光(guāng)信號積累(léi)實時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進程，zui後通(tōng)過標準曲(qū)綫對(duì)未(wèi)知(zhī)模板進行(háng)定量(liáng)分(fēn)析的方法(fǎ)
。相對定(dìng)量用(yòng)於(yú)測定一(yī)個測試樣(yàng)本中(zhōng)目(mù)標(biāo)核(hé)酸序列(liè)與校正樣本(běn)中同一序列表達的相對(duì)變(biàn)化
。校(xiào)正(zhèng)樣(yàng)本(běn)可(kě)以(yǐ)是(shì)一個(gè)未經處理的對(duì)照或者是在一個(gè)時辰(chén)研(yán)究中處於(yú)零時(shí)的(dí)樣本
。

相對定(dìng)量應用（Relative Quantification，RQ）

非特異(yì)性(xìng)熒光標記：

1，SYBR Green

   SYBR Green特性：

（1）隻(zhī)有和雙鏈DNA結合後(hòu)才(cái)發熒光(guāng)
。

（2）變性時(shí)，DNA雙(shuāng)鏈(liàn)分(fēn)開(kāi)，無熒(yíng)光
。

（3）在(zài)延伸結(jié)束階段(duàn)采(cǎi)集熒光信號
。

（4）SYBR Green也(yě)能(néng)和非(fēi)特異性的雙(shuāng)鏈DNA結合發光(guāng)，所以(yǐ)必須(xū)在(zài)反應(yīng)結束時(shí)做熔(róng)解曲(qū)綫(xiàn)分析
。

相(xiāng)對定量通過內標(biāo)定(dìng)量：
內標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin，GAPDH基因(yīn)等(děng)看家(jiā)基(jī)因，在細胞(bāo)中的(dí)表達(dá)量或在基因(yīn)組中(zhōng)的(dí)拷貝(bèi)數恒定，受(shòu)環境因(yīn)素(sù)影(yǐng)響(xiǎng)小，內(nèi)標定(dìng)量(liáng)結(jié)果(guǒ)代表了樣(yàng)本中所含細胞(bāo)或基因(yīn)組數(shù)量
。

相對定量分(fēn)析(xī)方(fāng)法(fǎ)：

2-ΔΔCt
前(qián)提(tí)：目(mù)標序列和(hé)內參(cān)序(xù)列(liè)的(dí)擴增效(xiào)率接近100％且偏(piān)差(chà)在5％以(yǐ)內
  1，用內參基因的CT值歸一目(mù)標(biāo)基(jī)因的(dí)CT值(zhí)：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2，用校準樣(yàng)本的(dí)ΔCT值歸一(yī)試驗樣本的(dí)ΔCT值(zhí)：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3，計(jì)算表達(dá)水平(píng)比率：
                    2 –ΔΔCT=表達量的比值(zhí)

服務流程(chéng)：

注意：客戶可(kě)根(gēn)據(jù)所能提供的(dí)起始(shǐ)材料不同，選擇(zé)從步(bù)驟1或(huò)2啟動項目
。