DNA甲(jiǎ)基(jī)化(huà)修飾(shì)檢(jiǎn)測服(fú)務

甲(jiǎ)基(jī)化(huà)特(tè)異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）

用亞(yà)硫酸(suān)氫鹽處(chǔ)理(lǐ)基因(yīn)組DNA，所有未發(fā)生甲基(jī)化(huà)的胞(bāo)嘧啶被轉(zhuǎn)化為(wéi)尿(niào)嘧(mì)啶(dìng)，而(ér)甲基(jī)化(huà)的胞嘧(mì)啶不變(biàn)；隨後設(shè)計針對甲(jiǎ)基化(huà)和非甲基化序列的引物進(jìn)行(háng)PCR。通過(guò)電(diàn)泳檢測(cè)MSP擴增產(chǎn)物(wù)，如果(guǒ)用針(zhēn)對處理(lǐ)後甲基化(huà)DNA鏈的引(yǐn)物能得到(dào)擴增片段，則說明該位(wèi)點存在(zài)甲(jiǎ)基化(huà)；反之(zhī)，說(shuō)明被(bèi)檢測(cè)的(dí)位(wèi)點(diǎn)不存(cún)在甲(jiǎ)基化。

亞硫酸氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）

用亞(yà)硫酸(suān)氫鹽處(chǔ)理(lǐ)基因(yīn)組DNA，則未發(fā)生甲(jiǎ)基化的(dí)胞嘧啶被(bèi)轉(zhuǎn)化(huà)為尿(niào)嘧(mì)啶(dìng)，而(ér)甲(jiǎ)基(jī)化的(dí)胞(bāo)嘧啶不(bù)變。隨後設計BSP引物(wù)進(jìn)行PCR，在(zài)擴增過程(chéng)中(zhōng)尿嘧(mì)啶(dìng)全(quán)部轉化(huà)為(wéi)胸腺嘧(mì)啶，zui後對(duì)PCR產物(wù)進行(háng)測序就可以判斷(duàn)CpG位(wèi)點(diǎn)是否發生甲(jiǎ)基(jī)化(huà)稱(chēng)為BSP-直接(jiē)測序方(fāng)法。將PCR產(chǎn)物(wù)克(kè)隆(lóng)至(zhì)載體後(hòu)進(jìn)行(háng)測(cè)序(xù)，可以提高(gāo)測序成(chéng)功率(shuài)，這種(zhǒng)方(fāng)法(fǎ)稱(chēng)為BSP-克隆測序(xù)法。

高分辨(biàn)率(shuài)熔解曲綫(xiàn)法（High Resolution Melting，HRM）

在非(fēi)CpG島(dǎo)位(wèi)置設計(jì)一(yī)對針對(duì)亞硫酸(suān)氫鹽(yán)修飾(shì)後(hòu)的DNA雙(shuāng)鏈的(dí)引物，這對引物中(zhōng)間(jiān)的片(piàn)段包(bāo)含感(gǎn)興(xīng)趣的CpG島。若(ruò)這(zhè)些CpG島(dǎo)發(fā)生(shēng)了甲基化，用(yòng)亞硫酸(suān)氫鹽(yán)處(chǔ)理(lǐ)後，未甲基化(huà)的胞嘧(mì)啶(dìng)經PCR擴增後轉變(biàn)成胸腺嘧啶(dìng)，而(ér)甲基(jī)化的胞(bāo)嘧(mì)啶(dìng)不變，樣品(pǐn)中(zhōng)的GC含量發(fā)生改變(biàn)，從而導致熔解(jiě)溫度的(dí)變(biàn)化。

DNA甲基化送樣要求
：

細(xì)胞（≥106 個）
，組織(zhī)（≥300mg）
，血液（≥1ml）
，血清(qīng)（≥1.5ml）等樣品(pǐn)材(cái)料，基因組DNA（體積(jī)≥20μl，濃(nóng)度≥50 ng/μl）。

DNA甲基(jī)化提供結果
：

引(yǐn)物序列(liè)
，實驗報告
，包括MSP產物(wù)的電(diàn)泳(yǒng)圖片(piàn)；引物序列(liè)
，測(cè)序(xù)峰圖
，陽性克隆質(zhì)粒(lì)和(hé)實(shí)驗報(bào)告；擴(kuò)增曲(qū)綫(xiàn)
，熔(róng)解(jiě)曲(qū)綫及實驗(yàn)報(bào)告。