細(xì)胞培(péi)養中的(dí)支原(yuán)體汙(wū)染的(dí)預防(fáng)及處理

　　細胞培養(yǎng)中的支原體汙染(rǎn)的(dí)預防(fáng)及處理
　　支(zhī)原(yuán)體(tǐ)是(shì)目前已(yǐ)知(zhī)一類(lèi)能在(zài)無生命(mìng)培養(yǎng)基(jī)上(shàng)生長繁(fán)殖的小(xiǎo)的(dí)原核細胞型微生(shēng)物。自(zì)然界分(fēn)布(bù)廣，種類(lèi)多(duō)，有80餘種，分(fēn)為兩個屬：一(yī)為支(zhī)原體(tǐ)屬(shǔ)(Mycoplasma)，有幾十個(gè)種(zhǒng);另(lìng)一(yī)為脲原體屬(shǔ)(Ureaplasma)，僅有(yǒu)一(yī)種。與人類(lèi)感(gǎn)染有關(guān)的(dí)主要是肺炎(yán)支原體和解(jiě)脲脲(niào)原(yuán)體(tǐ)。
　　支原(yuán)體無細胞壁(cell wall)，多呈不規(guī)則球(qiú)狀，長(cháng)絲狀，可分枝(zhī)，營(yíng)寄生(shēng)共生(shēng)或腐生。一(yī)般侵害對象為動植物，可造成(chéng)多種疾病。
　　細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)(特(tè)別是傳(chuán)代細(xì)胞(bāo))被支原體(tǐ)汙染是(shì)個(gè)世界性問題。國內外(wài)研(yán)究(jiū)表明，95%以上(shàng)是(shì)以下四(sì)種支原(yuán)體(tǐ)：口腔支(zhī)原(yuán)體(tǐ)(M.orale)，精氨(ān)酸(suān)支(zhī)原體(M.arginini)，豬鼻支原體(M.hyorhinis)和菜(cài)氏(shì)無膽甾原體(A.laidlawii)，為牛源性。國外調(tiáo)查證明，大約有二(èr)十多種支原體能(néng)汙(wū)染細胞，有的(dí)細胞株(zhū)可(kě)以同(tóng)時汙染(rǎn)兩(liǎng)種(zhǒng)以上(shàng)的支原體。
　　支原體(tǐ)汙(wū)染的(dí)來源包(bāo)括工(gōng)作環(huán)境(jìng)的(dí)汙染(rǎn)，操作(zuò)者(zhě)本身(shēn)的汙染(某(mǒu)些(xiē)支(zhī)原體在人體是(shì)正(zhèng)常菌群)，培養(yǎng)基的(dí)汙染，被汙(wū)染細胞造(zào)成的(dí)交叉汙染，實(shí)驗器材的汙(wū)染(rǎn)，製(zhì)備(bèi)細(xì)胞的(dí)原(yuán)始組(zǔ)織(zhī)或器(qì)官的汙(wū)染，等等。
　　體外(wài)生(shēng)長的細胞對(duì)微生(shēng)物及(jí)一些有害(hài)有(yǒu)毒物質沒有(yǒu)抵(dǐ)抗(kàng)能力，因此培養(yǎng)基應達(dá)到(dào)無化(huà)學物質(zhì)汙染，無微(wēi)生物(wù)汙染(rǎn)(如細菌，真(zhēn)菌(jūn)，支原體(tǐ)，病毒(dú)等(děng))，無(wú)其(qí)他對細(xì)胞(bāo)產生(shēng)損(sǔn)傷作(zuò)用(yòng)的(dí)生物活(huó)性物質汙染(如(rú)抗體，補體)。對(duì)於(yú)天(tiān)然(rán)培(péi)養基，汙染(rǎn)主要(yào)來源於取材(cái)過程及生(shēng)物材料本身，應當嚴格選(xuǎn)材(cái)，嚴(yán)格操(cāo)作。對(duì)於(yú)合(hé)成培(péi)養(yǎng)基(jī)，汙染主(zhǔ)要來(lái)源於配製(zhì)過程(chéng)，配(pèi)製所用的(dí)水(shuǐ)，器(qì)皿(mǐn)應十(shí)分潔(jié)淨(jìng)，配製(zhì)後應嚴(yán)格(gé)過濾(lǜ)除(chú)菌(jūn)。
　　由於體外培養(yǎng)細胞(bāo)自(zì)身沒有(yǒu)抵抗(kàng)汙染的能力(lì)，而(ér)且培(péi)養基(jī)中(zhōng)的抗生素(antibiotic)抗汙染(rǎn)能力有限(xiàn)，因(yīn)而培養(yǎng)細(xì)胞一旦(dàn)發生(shēng)汙(wū)染多數將無(wú)法(fǎ)挽回。支(zhī)原(yuán)體汙(wū)染後，因為它(tā)們不會使細胞死亡(wáng)可以與細胞(bāo)長(cháng)期共存，培(péi)養基一般不(bù)發(fā)生渾濁(zhuó)，細胞(bāo)無(wú)明顯變化，外觀上給(gěi)人(rén)以正常感覺，實(shí)則細(xì)胞手到多方麵(miàn)潛(qián)在影響，如(rú)引起細胞變形，影響DNA合(hé)成(chéng)，抑製(zhì)細胞(bāo)生長等。
　　組織(zhī)細胞(bāo)培養工作中，可(kě)以(yǐ)從(cóng)以下幾(jī)方麵來預防(fáng)支原(yuán)體(tǐ)的(dí)汙(wū)染：控製環(huán)境汙染(rǎn);嚴格實驗(yàn)操(cāo)作(zuò);細胞培(péi)養(yǎng)基和(hé)器材(cái)要保(bǎo)證無菌(jūn);在(zài)細胞培(péi)養基衝(chōng)加(jiā)入適(shì)量的(dí)抗生素(antibiotic)。
　　抗生(shēng)素(antibiotic)主要用於消(xiāo)毒培養(yǎng)液(yè)，是培(péi)養過(guò)程(chéng)中預(yù)防微(wēi)生(shēng)物汙(wū)染(rǎn)的重(zhòng)要手段，也是(shì)微生(shēng)物汙染不嚴(yán)重時(shí)的(dí)“急(jí)救(jiù)”方(fāng)法。不同抗(kàng)生素(sù)(antibiotic)殺滅(miè)微(wēi)生物(wù)不(bù)同，應根(gēn)據(jù)需要選擇。
　　在(zài)細胞(bāo)培養過(guò)程中(zhōng)如(rú)果(guǒ)發現(xiàn)破(pò)碎的(dí)細胞(bāo)甚(shèn)多(duō)，培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)需(xū)要(yào)頻(pín)繁改善(shàn)營養環(huán)境才(cái)能支持長(cháng)期傳(chuán)代培養時(shí)，應(yīng)該懷疑支(zhī)原體汙染。支(zhī)原體(tǐ)汙染(rǎn)難以觀(guān)察(chá)特殊(shū)的外觀(guān)變(biàn)化(huà)，培養液也不渾濁。
　　支(zhī)原體汙(wū)染(rǎn)細胞後，特(tè)別(bié)是重(zhòng)要(yào)的細(xì)胞株，有必要(yào)清(qīng)除(chú)支(zhī)原(yuán)體，常(cháng)用(yòng)方(fāng)法有(yǒu)：抗生素(antibiotic)處理，抗血(xiě)清(qīng)處理，抗(kàng)生素(sù)(antibiotic)加抗(kàng)血清和補體(tǐ)聯合(hé)處(chǔ)理。要注意(yì)的(dí)是：支原(yuán)體沒有(yǒu)細胞壁(cell wall)，故作用於細胞壁(cell wall)生(shēng)物合成(chéng)的抗生(shēng)素(sù)(antibiotic)，如(rú)內酰(xiān)胺(àn)類(lèi)，萬(wàn)古黴素等(děng)是不敏感的(dí);對(duì)多粘菌(jūn)素，利福平，磺(huáng)胺藥(yào)物(wù)普(pǔ)遍(biàn)耐。對(duì)支原體(tǐ)比較(jiào)有抑(yì)製活性抗生素(antibiotic)是(shì)四環素類，大(dà)環內酯(zhǐ)類等，氨基糖苷(gān)類(lèi)，氯(lǜ)黴素對支原體有較小的(dí)抑製作用(yòng)。必(bì)要時(shí)更換(huàn)所(suǒ)有培養(yǎng)用(yòng)物。通常，濾過除(chú)菌(jūn)的方法對支原體(tǐ)是(shì)沒(méi)有(yǒu)作用的。
　　由於一些微生(shēng)物，如支原體(tǐ)，病毒等(děng)能通過濾(lǜ)膜(mó)，所以過濾藥品仍(réng)潛在(zài)被外源微(wēi)生(shēng)物汙染的危(wēi)險(xiǎn)，近(jìn)年來(lái)，60Co輻射滅(miè)菌(jūn)技術在醫(yī)藥，食品等(děng)領(lǐng)域有較(jiào)廣的應用，由於(yú)輻(fú)射滅(miè)菌能(néng)夠(gòu)*殺滅(miè)所有微(wēi)生(shēng)物。有(yǒu)試驗證實以2Mrad輻(fú)射(shè)處理的各培養基(jī)樣品(pǐn)達到了無菌(jūn)要(yào)求，經多批培養(yǎng)試驗(yàn)，輻(fú)射滅菌安全可(kě)靠;輻射滅菌(jūn)的(dí)培養基營養性(xìng)能不低於(yú)過濾(lǜ)組，證(zhèng)明輻(fú)射滅菌對培(péi)養(yǎng)基(jī)性能無不(bù)良影(yǐng)響(xiǎng);對(duì)血(xiě)清的(dí)輻射滅菌(jūn)試(shì)驗效(xiào)果也(yě)表(biǎo)明60COγ射綫(xiàn)不(bù)影響(xiǎng)培養效(xiào)果(guǒ)。把(bǎ)幹粉培(péi)養基經無(wú)菌(jūn)操做定(dìng)量(liáng)分裝(zhuāng)於滅(miè)菌容(róng)器(qì)內(nèi)，輻射後以(yǐ)幹粉(fěn)原型貯(zhù)藏，不(bù)但(dàn)培(péi)養基的純(chún)淨(jìng)性(xìng)得到保障，而(ér)且營養性能(néng)較(jiào)過(guò)濾(lǜ)後(hòu)以(yǐ)水(shuǐ)溶液(yè)形式(shì)保(bǎo)存更(gēng)穩定，對穀氨酰(xiān)胺等這類(lèi)水溶液不(bù)穩(wěn)定(dìng)者特(tè)別(bié)合適(shì)。
　　目前，有(yǒu)專(zhuān)門(mén)做(zuò)支原體檢測的試劑盒，可(kě)以(yǐ)用(yòng)細(xì)胞(bāo)滴片(piàn)檢(jiǎn)測。市場上已(yǐ)有(yǒu)了(liǎo)新(xīn)一代支原(yuán)體(tǐ)抗生(shēng)素(antibiotic)M-Plasmocin(InvivoGen公(gōng)司(sī))，能有效的殺滅支原體，又不影(yǐng)響(xiǎng)細(xì)胞本身的(dí)代(dài)謝，而(ér)且(qiě)處(chǔ)理(lǐ)過(guò)的(dí)細(xì)胞(bāo)不會重(zhòng)新感染支原體(tǐ)。另(lìng)外(wài)，配(pèi)合支原(yuán)體檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)(市場上有(yǒu)售(shòu)，如美國ICN公司的(dí)產品(pǐn))，可(kě)以(yǐ)幫(bāng)助盡(jìn)快發現支原(yuán)體的(dí)汙染(rǎn)。