製(zhì)備(bèi)微(wēi)生物檢測培(péi)養(yǎng)基細節問(wèn)題(tí)

　　製備微生物檢測(cè)培養(yǎng)基細(xì)節問(wèn)題
　　一，稱取(qǔ)
　　用度1/100的電(diàn)子天(tiān)平稱取培養(yǎng)基所(suǒ)需(xū)藥(yào)品(pǐn)。先根(gēn)據配方(fāng)計算出配製(zhì)一定量(liáng)培養基(jī)所需各種(zhǒng)成分藥(yào)品的量，然(rán)後用天平準確(què)稱取(qǔ)。稱量(liáng)時(shí)用稱量(liáng)紙折疊成簸箕(jī)狀(zhuàng)盛放(fàng)藥(yào)品。稱(chēng)量(liáng)紙(zhǐ)折疊方法如圖所(suǒ)示。
　　二，溶化(huà)
　　培養(yǎng)基放入(rù)燒杯(bēi)或(huò)搪(táng)瓷(cí)缸中(zhōng)，慢(màn)慢加入少量所需水，邊(biān)加入(rù)邊用玻棒攪(jiǎo)拌。如(rú)果(guǒ)培養基(jī)中不(bù)含(hán)有瓊脂，培養(yǎng)基不需(xū)要(yào)加(jiā)熱(rè);如果含有瓊(qióng)脂(zhī)，則(zé)需(xū)要用本生(shēng)燈或電(diàn)磁爐(lú)加熱(rè)煮(zhǔ)沸(fèi)，*溶解後，再(zài)補(bǔ)齊(qí)所需水，並(bìng)攪拌(bàn)均匀(如圖3所示)。如果(guǒ)配(pèi)製的培養(yǎng)基量(liáng)很(hěn)大，可用不鏽鋼鍋(guō)加(jiā)熱溶化，可先(xiān)用(yòng)溫水(shuǐ)加熱並(bìng)隨時攪動，防止焦化，如有焦(jiāo)化現象，配製(zhì)的培養(yǎng)基就不(bù)能使(shǐ)用，要重新(xīn)配製。
　　配製培(péi)養基時(shí)不可(kě)用(yòng)銅或鐵(tiě)的(dí)容(róng)器溶(róng)化，因(yīn)銅或(huò)鐵製容器可(kě)能會(huì)使培(péi)養基(jī)中的銅和鐵(tiě)的含量超(chāo)標，影響實(shí)驗(yàn)(培養基中(zhōng)銅(tóng)含(hán)量(liáng)大於(yú)0.3mg/L，細菌(jūn)不(bù)宜生長(cháng)，鐵(tiě)含(hán)量超過0.14mg/L，妨(fáng)礙細(xì)菌產(chǎn)毒(dú)素)。對容(róng)易發(fā)生反應，產(chǎn)生沉(chén)澱(diàn)的藥品，要(yào)分開溶(róng)解，後麵加入培(péi)養基，如磷(lín)酸氫二鉀(jiǎ)和硫(liú)酸鎂。
　　三，調pH
　　雖然培養(yǎng)基(jī)中(zhōng)含有(yǒu)緩衝物質(zhì)成分(fēn)，能使培養基(jī)的(dí)pH盡(jìn)可(kě)能的保持(chí)在(zài)要求(qiú)的範圍(wéi)內(nèi)，但是配(pèi)出(chū)的培養基若(ruò)不(bù)符(fú)合要(yào)求(qiú)，就要(yào)進行必要的調(tiáo)整(zhěng)。如果有已校(xiào)準pH計，可(kě)用pH計(jì)，如果沒(méi)有，可用(yòng)精(jīng)密的pH試(shì)紙(zhǐ)，再根(gēn)據需要用(yòng)1 mol/L*或1mol/L鹽酸(微調可(kě)用(yòng)0.1*或(huò)0.1mol/L鹽(yán)酸)調製所需(xū)的pH。培基(jī)的pH一般(bān)為7.4～7.6，也(yě)有(yǒu)酸性或鹼性的。用(yòng)*調(tiáo)整的需要高(gāo)壓(yā)的(dí)培(péi)養(yǎng)基(jī)，在調整(zhěng)pH時要調至(zhì)高(gāo)出所(suǒ)需(xū)0.1個(gè)～0.2個單位(wèi)，因(yīn)用*調整時，高壓後，培養基(jī)的pH要(yào)降(jiàng)低0.1~0.2。如培(péi)養基中含(hán)有碳(tàn)酸鈣(gài)成分(fēn)，可不(bù)pH。
　　四(sì)，過(guò)濾
　　配成(chéng)的(dí)培(péi)養基，若(ruò)無特(tè)殊(shū)要求，可(kě)省(shěng)略(lüè)此步。若有(yǒu)沉澱或(huò)渾濁.需(xū)要(yào)澄(chéng)清(qīng)的.液(yè)體培養(yǎng)基可用(yòng)油(yóu)紙過濾(lǜ)。而固體(tǐ)培(péi)養(yǎng)基(jī)可(kě)用中(zhōng)間(jiān)夾一薄(báo)層(céng)脫(tuō)脂棉(mián)的(dí)雙層紗布過濾(lǜ)。如(rú)果過濾法還不能(néng)達到(dào)澄清的(dí)要求，則可(kě)用(yòng)蛋清澄清法，即培(péi)養基加熱冷(lěng)卻(què)到(dào)50~60℃，裝(zhuāng)入三(sān)角瓶內(nèi)(不(bù)超過容(róng)量的(dí)二分之(zhī)一)，按1000mL加(jiā)人1個(gè)～2個(gè)雞蛋的蛋(dàn)清(qīng)，用(yòng)力搖晃(huǎng)3-5min，高壓蒸(zhēng)汽121℃，20min，取出趁熱(rè)過濾(lǜ)即(jí)可。
　　五(wǔ)，分裝
　　配製(zhì)好的(dí)培養(yǎng)基(jī)根據不同(tóng)的用途(tú)分裝在(zài)三(sān)角瓶，試(shì)管等(děng)容器中，分裝(zhuāng)試(shì)管(guǎn)，如果(guǒ)試管量(liáng)很(hěn)大(dà)，可用自(zì)動分液器(qì)，如果試管量(liáng)少，可用漏鬥分裝。分裝量(liáng)不(bù)超過容(róng)器容(róng)積的三分之(zhī)二。三(sān)角(jiǎo)瓶以不(bù)超過容(róng)積的(dí)二分(fēn)之(zhī)一為宜;瓊(qióng)脂(zhī)斜麵以(yǐ)不超(chāo)過試(shì)管長(cháng)度(dù)的五(wǔ)分(fēn)之一(yī)為(wéi)宜(yí)，後，擺成的斜麵(miàn)為(wéi)培養基量(liáng)的三分之一，底(dǐ)層為(wéi)三分之二(èr)的(dí)量為(wéi)宜(yí);半固(gù)體瓊脂分裝(zhuāng)量為(wéi)試管(guǎn)長(cháng)度的三(sān)分之一(yī);用來接(jiē)種或(huò)保(bǎo)菌的高(gāo)層瓊(qióng)脂(zhī)，分裝量(liáng)為(wéi)試管(guǎn)長度(dù)的(dí)四分(fēn)之一(yī)或(huò)三分之(zhī)一，用來接種(zhǒng)厭(yàn)氧菌的要達(dá)到三分之(zhī)二;瓊(qióng)脂平(píng)板，內徑為90mm的以13mL~15 mL為宜(yí)，內徑70mm的(dí)平板(bǎn)為(wéi)8mL~10 mL，製成的(dí)瓊(qióng)脂平(píng)板(bǎn)若表麵(miàn)水(shuǐ)分較多，可將平板(bǎn)倒扣(kòu)，放置在37℃培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)內(nèi)30min，幹燥後(hòu)再(zài)用(yòng)。每批培(péi)養基應(yīng)另外分(fēn)裝(zhuāng)一(yī)小玻(bō)璃瓶(約20mL)與(yǔ)該批培養基(jī)同時，為測定該批培(péi)養基後麵為pH。
　　六，
　　分裝好(hǎo)的(dí)培(péi)養(yǎng)基(jī)應立(lì)即進行的(dí)方法種(zhǒng)類如下：
　　1. 高(gāo)壓蒸(zhēng)汽(qì)法
　　大多耐熱培養(yǎng)基都可(kě)用此法(fǎ)，小量(liáng)分裝時(shí)，用(yòng)121℃，15min;量大時，用(yòng)121℃，30min;含(hán)糖類(lèi)的(dí)培養基隻(zhī)能(néng)113~115℃，15min，避免糖類遭破壞(huài)。
　　2.煮沸(fèi)法
　　對含有不耐(nài)高溫物質的(dí)培養基，可(kě)使(shǐ)用此方(fāng)法。
　　3.過濾(lǜ)
　　以過濾(lǜ)的方(fāng)法，用無菌(jūn)操(cāo)作技(jì)術(shù)，定量(liáng)加入培養基。血液，抗生素可用(yòng)無(wú)菌(jūn)操(cāo)作(zuò)技術抽取，加(jiā)入(rù)冷卻(què)到50℃左右(yòu)的培(péi)養基(jī)中。培養基(jī)含有(yǒu)不(bù)耐(nài)熱的物(wù)質(zhì)時，可(kě)用此法。
　　對LST培養基進(jìn)行(háng)時，有時(shí)發酵管(guǎn)內會有氣泡。為(wéi)防止發酵(jiào)管內產生氣泡(pào)，可以采(cǎi)取以下幾項(xiàng)措(cuò)施：
　　1. 小(xiǎo)倒管(guǎn)浸(jìn)滿培(péi)養基(不留氣(qì)泡(pào))後再(zài)加(jiā)入(rù)到(dào)盛LST的試管中(zhōng)。
　　2.鍋(guō)關閉放氣(qì)閥(fá)前，將鍋內氣(qì)體排幹淨。
　　3.試(shì)管塞(sāi)不要(yào)塞得(dé)太(tài)緊(使用(yòng)矽(guī)膠塞的時候(hòu))，勿使用橡皮塞。
　　4不要(yào)過(guò)早(zǎo)打(dǎ)開鍋，要等鍋(guō)內氣壓(yā)和溫度都(dū)降(jiàng)到(dào)與室溫(wēn)一致或相差不大時再打(dǎ)開鍋。
　　如(rú)果(guǒ)以(yǐ)上情況都做(zuò)到還有氣(qì)泡(pào)，可用水(shuǐ)做培養基組的(dí)對(duì)照試(shì)驗(yàn)，若培養基(jī)組有氣(qì)泡，而對(duì)照組(zǔ)沒(méi)有(yǒu)氣(qì)泡(pào)可確定是(shì)培養基(jī)自(zì)身的(dí)原因(yīn)。
　　七，倒平板
　　融(róng)化的培養基冷卻(què)到50℃後，倒(dǎo)入無菌幹(gān)燥(zào)的(dí)培(péi)養皿(mǐn)中。培養基的溫(wēn)度不(bù)能過高，否則(zé)容易在培(péi)養(yǎng)皿的(dí)內蓋上形(xíng)成太(tài)多(duō)的冷(lěng)凝水;溫(wēn)度太低，培(péi)養(yǎng)基又容易凝固(gù)成塊(kuài)，無法(fǎ)製成平(píng)板。倒平板時，應(yīng)在靠近酒(jiǔ)精燈火焰進(jìn)行，以免外界(jiè)的雜(zá)菌落入平板(bǎn)內，左(zuǒ)手(shǒu)拿培養(yǎng)皿，右手拿(ná)三(sān)角(jiǎo)瓶(píng)的底部，用左手的(dí)小(xiǎo)指和(hé)手(shǒu)掌(zhǎng)部位(wèi)把三(sān)角瓶的棉塞(sāi)拔下，灼燒瓶口，用大(dà)拇(mǔ)指(zhǐ)和(hé)食(shí)指把(bǎ)培養(yǎng)皿蓋打(dǎ)開一條(tiáo)縫，至(zhì)瓶口(kǒu)剛好伸(shēn)入，倒(dǎo)入(rù)培養(yǎng)基(jī)，以鋪滿(mǎn)底為(wéi)限，不(bù)超過(guò)培(péi)養(yǎng)皿高(gāo)度的(dí)三分(fēn)之一，迅(xùn)速蓋(gài)好(hǎo)蓋，放在(zài)桌麵上(shàng)，輕(qīng)輕地(dì)轉動(dòng)培養皿，使培(péi)養基分布均(jūn)匀(yún)，冷凝後即(jí)可(kě)。
　　八(bā)，擺斜麵
　　裝在試管中的瓊脂(zhī)培養基，在完成(chéng)後，趁(chèn)熱(rè)立即擺放在木棒(bàng)(或玻璃棒)上(shàng)，並成適(shì)當的(dí)斜度，冷卻後，瓊(qióng)脂凝固(gù)即(jí)成(chéng)斜(xié)麵(miàn)。斜(xié)麵長(cháng)度(dù)不用(yòng)超過試(shì)管二(èr)分(fēn)之(zhī)一。
　　九(jiǔ)，質(zhì)量檢查
　　培(péi)養基後(hòu)仔細(xì)檢(jiǎn)查一遍，發(fā)現有(yǒu)破裂(liè)，水分浸入(rù)，色澤異常，棉(mián)塞被(bèi)培養(yǎng)基(jī)沾染，都(dū)要(yào)丟棄(qì)，不能(néng)再(zài)用(yòng)。並測(cè)定其後麵(miàn)為pH。還需(xū)進行(háng)無(wú)菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)和(hé)效(xiào)果檢(jiǎn)查(chá)。無菌(jūn)檢查(chá)是(shì)將(jiāng)後的培養基取1管(guǎn)(瓶(píng))~2管(瓶(píng))，37℃恒溫(wēn)培(péi)養(yǎng)1d～2d，確定(dìng)無雜菌(jūn)生長(cháng);效果檢(jiǎn)查(chá)是(shì)用(yòng)標準(zhǔn)菌株接種在相關的培(péi)養(yǎng)基上檢(jiǎn)查(chá)檢查菌的(dí)生長，形態(tài)及生(shēng)化情況，與已(yǐ)知(zhī)情(qíng)況相符。兩種情(qíng)況都(dū)合(hé)格，配製的培(péi)養基方可使用。