DMEM培養(yǎng)基(jī)成(chéng)分分析實驗步(bù)驟

　　DMEM培養(yǎng)基成分分(fēn)析(xī)實驗步(bù)驟
　　DMEM培(péi)養基(jī)是一種含各種氨(ān)基酸和葡萄(táo)糖的培(péi)養基(jī),分(fēn)為(wéi)高(gāo)糖(táng)和低糖,碳酸氫鈉(nà)緩衝(chōng)體係.是(shì)在Eagle MEM基礎上(shàng)增(zēng)加(jiā)了各成分的用量(加倍(bèi)),葡(pú)萄(táo)糖可(kě)以選(xuǎn)擇低糖(táng)(1000mg/L)和(hé)高(gāo)糖(4500mg/L),對於(yú)生(shēng)長(cháng)速度快,附著性(xìng)差的腫瘤細胞(bāo)生長有利.特別(bié)在(zài)附著性(xìng)較(jiào)差,但又(yòu)不希望(wàng)它(tā)脫離(lí)原來生長點的(dí)克隆培養(yǎng)時(shí),采(cǎi)用高糖(táng)濃度的培養基效果較(jiào)好,常(cháng)用於雜交瘤技(jì)術中(zhōng)骨(gǔ)髓(suǐ)細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉化細胞(bāo)培養以(yǐ)及疫苗(miáo)生產和(hé)各種(zhǒng)初代病毒(dú)宿主(zhǔ)細(xì)胞的細(xì)胞培(péi)養(yǎng)及單(dān)一(yī)細胞(bāo)培(péi)養.高糖型有(yǒu)利(lì)於(yú)細(xì)胞(bāo)停泊於(yú)一個位置(zhì)生長(cháng),適於生(shēng)長較快(kuài)，附著較困(kùn)難(nán)腫(zhǒng)瘤(liú)細胞等.
　　改良(liáng)的(dí)DMEM培養(yǎng)基是為小(xiǎo)鼠(shǔ)成纖維細胞設(shè)計的,現在常用於(yú)貼(tiē)壁(bì)細(xì)胞(bāo)的培(péi)養(yǎng).DMEM的氨基酸(suān)濃度是MEM的兩倍(bèi),維(wéi)生(shēng)素(sù)濃度是MEM的4倍,采用(yòng)雙倍的(dí)HCO3-和(hé)CO2濃(nóng)度(dù)起到更好(hǎo)的緩(huǎn)衝作(zuò)用(yòng).
　　DMEM培養基成分分析實驗步(bù)驟(zhòu):
　　1，取清洗幹(gān)淨的500mL大(dà)燒杯一個,加入新(xīn)鮮製(zhì)備(bèi)的三蒸(zhēng)水約(yuē)300mL,加熱至15~30℃;
　　2，將(jiāng)DMEM幹粉袋豎立輕彈,使袋中粉下沉,剪(jiǎn)開袋口,將幹粉(fěn)倒入500mL的大燒杯中(zhōng),用(yòng)超純水衝洗(xǐ)袋2~3次(cì);
　　3，放(fàng)入清洗(xǐ)幹(gān)淨的磁子,在(zài)磁力攪拌器(qì)充(chōng)分攪拌,以確保培養基幹(gān)粉(fěn)充分(fēn)溶(róng)解(jiě);
　　4，根據配(pèi)方(fāng)要求,加(jiā)入準確(què)稱(chēng)取(qǔ)的(dí)NaHCO31.85g,L-穀氨(ān)酰胺0.1g,充(chōng)分(fēn)搖(yáo)匀(yún)至(zhì)*溶解(jiě);
　　5，加(jiā)入已(yǐ)經製備好的雙(shuāng)抗(kàng)溶液(yè),使(shǐ)青(qīng)黴素(sù)和(hé)鏈(liàn)黴素的使(shǐ)用(yòng)濃度(dù)達(dá)到100ug/mL;加入培養(yǎng)基(jī)總體積約10%的(dí)已滅活(huó)的(dí)小牛血清;
　　6，用濃(nóng)度為(wéi)7.4%的NaHCO3溶(róng)液調(tiáo)整溶液的pH值(zhí)為7.2~7.4,加超純水(shuǐ)定容,並將培(péi)養(yǎng)液(yè)轉入(rù)鹽水瓶;用一(yī)次性濾(lǜ)器過濾上(shàng)述培養液(yè)到滅菌的鹽水(shuǐ)瓶(píng),封口(kǒu),4℃保存備用.