蛋白(bái)酶是人類免(miǎn)疫缺陷病(bìng)毒(dú)基(jī)因(yīn)編(biān)碼中的一種(zhǒng)特(tè)異天冬酰(xiān)蛋白酶,其作(zuò)用(yòng)是將基因(yīn)和(hé)基因(yīn)表達所產生的蛋白(bái)裂(liè)解,成(chéng)為(wéi)具(jù)有活(huó)性的病毒結(jié)構蛋(dàn)白和(hé)酶。蛋白(bái)酶(méi)抑製劑(jì)從(cóng)廣義上指(zhǐ)與蛋白酶分子活(huó)性中(zhōng)心(xīn)上(shàng)的一些基團結合,使蛋白酶活力下降,甚(shèn)至消(xiāo)失,但(dàn)不(bù)使酶(méi)蛋白(bái)變性的物(wù)質(zhì)。
不同(tóng)蛋白酶抑製劑的作(zuò)用(yòng)
PMSF
1)抑(yì)製絲氨酸蛋白(bái)酶(如(rú)胰凝乳(rǔ)蛋白酶,胰蛋(dàn)白(bái)酶,凝(níng)血(xiě)酶)和巰基蛋白(bái)酶(如木瓜蛋白(bái)酶);
2)10mg/ml溶於異(yì)丙(bǐng)醇中;
3)在室溫下(xià)可(kě)保存一年;
4)工作濃(nóng)度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);
5)在水液(yè)體(tǐ)溶(róng)液(yè)中(zhōng)不穩定,必須在每(měi)一(yī)分離和(hé)純(chún)化步(bù)驟(zhòu)中(zhōng)加入新(xīn)鮮(xiān)的(dí)PMSF。EDTA
1)抑(yì)製(zhì)金屬(shǔ)蛋白水(shuǐ)解酶(méi);
2)0.5mol/L水溶液,pH8~9;
3)溶(róng)液(yè)在(zài)4℃穩定(dìng)六個月以上(shàng);
4)工作(zuò)濃度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);
5)加(jiā)入(rù)NaOH調(tiáo)節溶液的(dí)pH值(zhí),否(fǒu)則(zé)EDTA不溶解(jiě)。
胃蛋(dàn)白酶(méi)抑製劑(pepstantin)
l)抑(yì)製(zhì)酸性蛋(dàn)白(bái)酶(méi)如胃蛋白酶,血管緊(jǐn)張肽酶,組織蛋白(bái)酶(méi)D和(hé)凝乳酶;
2)1mg/ml溶於甲醇中;
3}儲存液在4℃一(yī)周(zhōu)內(nèi)穩定,-20℃穩定(dìng)6個月;
4)1作(zuò)濃度(dù):0.7ug/ml(1umol/L)
5)在水(shuǐ)中不溶(róng)解。
亮抑(yì)蛋(dàn)白(bái)酶(méi)肽(tài)(leupeptin)
1)抑(yì)製(zhì)絲(sī)氨酸(suān)和巰基蛋白酶,如木瓜蛋(dàn)白酶,血漿酶(méi)和組織蛋(dàn)白(bái)酶(méi)B;
2)lOmg/ml溶於(yú)水(shuǐ);
3)儲存液4℃穩定(dìng)一(yī)周(zhōu),-20℃穩定(dìng)6個月;
4)工作濃(nóng)度0.5ug/ml。
胰(yí)蛋白酶抑(yì)製(zhì)劑(jì)(aprotinin)
1)抑(yì)製(zhì)絲(sī)氨酸蛋白酶,如(rú)血漿酶,血管舒(shū)緩(huǎn)素,胰(yí)蛋白酶和(hé)胰(yí)凝(níng)乳蛋(dàn)白酶(méi);
2)lOmg/ml溶(róng)於(yú)水,pH7~8
3}儲存液(yè)4℃穩定一周,-20℃穩定(dìng)6個月(yuè);
4)工作(zuò)濃度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);
5)避免反復(fù)凍融:
6)在(zài)pH>12.8時失活(huó)。