siRNA幹擾檢(jiǎn)測服(fú)務(wù)廠家(jiā)

原理：RNA幹(gān)擾(rǎo) (RNA interference, RNAi)技術，是將與(yǔ)內源(yuán)mRNA 編(biān)碼區同源的小片(piàn)段(19 -23bp)外源(yuán)雙(shuāng)鏈(liàn) RNA(siRNA)導入(rù)細(xì)胞(bāo)中，引(yǐn)發細(xì)胞(bāo)中相(xiāng)應mRNA 高效特異性降(jiàng)解，從(cóng)而導(dǎo)致(zhì)特定(dìng)基因(yīn)表(biǎo)達沉默(mò)(knock down)的(dí)一種實驗技(jì)術(shù)，其(qí)中通(tōng)過構(gòu)建(jiàn)表達(dá)載(zǎi)體(tǐ)表達(dá)siRNA是多(duō)種siRNA製備方(fāng)法中有可(kě)能(néng)進行(háng)長(cháng)期(qī)基因(yīn)沉默(mò)研究(jiū)的(dí)方法，siRNA 載體可以(yǐ)在細胞內(nèi)直接(jiē)轉錄出shrna ，其幹擾(rǎo)效果等同(tóng)於siRNA ，而且(qiě)能(néng)夠(gòu)解決 siRNA幹擾時間短(duǎn)的(dí)缺點
。您隻(zhī)需提供需幹擾(rǎo)基(jī)因的詳細信(xìn)息(xī)，包(bāo)括基(jī)因(yīn)的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所(suǒ)屬物種，本(běn)公司負責設計3條針對目的mRNA的siRNA 靶序列，在(zài)短時間內構建三(sān)個(gè)可用於目(mù)的mRNA幹(gān)擾實(shí)驗(yàn)的(dí)siRNA 載(zǎi)體並(bìng)為(wéi)您進行(háng)後續(xù)的幹擾(rǎo)實(shí)驗研(yán)究(jiū)
。

siRNA幹擾檢測服(fú)務廠(chǎng)家實驗流程

◇ 選擇siRNA表達(dá)載(zǎi)體 通過人工(gōng)合成基(jī)因(yīn)的(dí)方(fāng)法將(jiāng)該序列克隆至(zhì)Clontech公司的RNAi-Ready pSIREN係(xì)列(liè)表達載(zǎi)體中(zhōng)，該(gāi)係列表達載(zǎi)體(tǐ)帶(dài)有(yǒu)Pol III(U6)啟動子(zǐ)，具有轉染效率(shuài)高，操(cāo)作簡單(dān)，rna沉默效(xiào)果易於檢(jiǎn)測等(děng)特(tè)點，客(kè)戶(hù)可根據需要進(jìn)行(háng)選(xuǎn)擇(zé)
。

siRNA幹(gān)擾檢(jiǎn)測服(fú)務 (RNA interference, RNAi)技術(shù)，是(shì)將與內(nèi)源(yuán)mRNA 編碼區同(tóng)源的小片(piàn)段(duàn)(19 -23bp)外源雙鏈(liàn) RNA(siRNA)導入細胞(bāo)中，引發(fā)細(xì)胞(bāo)中相(xiāng)應(yīng)mRNA 高(gāo)效特異(yì)性降(jiàng)解，從而(ér)導致特定(dìng)基因(yīn)表(biǎo)達(dá)沉默(mò)(knock down)的一種實驗技術
。

◇ 根(gēn)據客戶提交的目的mRNA序列(liè)，設(shè)計3條RNA幹(gān)擾(rǎo)靶序列(liè)，靶(bǎ)序列一般(bān)為19-21nt 長
。

◇ 對於(yú)每(měi)條選(xuǎn)定的(dí)siRNA 靶序(xù)列，設計 siRNA 正義鏈和(hé)反(fǎn)義鏈(liàn)，以(yǐ) loop(9nt or 10nt) 相連(lián)，形(xíng)成穩定的(dí)發卡RNA，稱(chēng)為 shRNA(short hairpin RNA)
。

◇ 合成模(mó)板 合成(chéng)每(měi)條編(biān)碼 shRNA的DNA 模板，並(bìng)連(lián)接到(dào) siRNA 載(zǎi)體相(xiāng)應(yīng)的多克隆位點(diǎn)之間
。連接(jiē)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸杆(gān)菌
。

◇ 抽(chōu)提陽性(xìng)克隆質(zhì)粒 公司(sī)試(shì)劑盒(hé)抽(chōu)提陽(yáng)性克隆載體並定量
。

◇ 轉(zhuǎn)染(rǎn)細(xì)胞(bāo) 質粒直(zhí)接(jiē)轉染或通過病(bìng)毒包裝(zhuāng)後轉染細胞，並對(duì)轉(zhuǎn)染(rǎn)細胞(bāo)進行(háng)陽(yáng)性(xìng)鑒定和轉代細(xì)胞(bāo)株(zhū)的培(péi)養
。