ELISA檢(jiǎn)測在不同(tóng)類(lèi)型樣(yàng)本的(dí)不同(tóng)處(chǔ)理(lǐ)辦(bàn)法(fǎ)

 　　ELISA檢測(cè)在不同類(lèi)型樣本(běn)的不同(tóng)處(chǔ)理辦法(fǎ)
　　通(tōng)常我們可(kě)用於(yú)ELISA檢(jiǎn)測的(dí)樣本(běn)是有(yǒu)多(duō)種類型的，如(rú)血清(qīng)，血(xiě)漿(jiāng)，尿(niào)液，細胞培(péi)養(yǎng)上清或(huò)組織(zhī)匀漿(jiāng)液(yè)等，不同類型的(dí)檢測(cè)樣本(běn)前(qián)期(qī)的處(chǔ)理方(fāng)法是(shì)不(bù)一樣(yàng)的。正確的處理樣(yàng)本是(shì)保證ELISA檢(jiǎn)測的正確性(xìng)和(hé)準確性的*步，下麵(miàn)簡單介紹(shào)一下(xià)不同(tóng)類型(xíng)的(dí)樣(yàng)本的處理(lǐ)方法。
　　1，  血清
　　血清(qīng)是zui常用(yòng)於(yú)ELISA檢測的(dí)一類樣本(běn)，處理也(yě)比(bǐ)較簡單(dān)。
　　用無(wú)熱原(yuán)，無(wú)內毒(dú)素的試管或(huò)離(lí)心管(guǎn)采(cǎi)集血液標本，將試(shì)管或(huò)離(lí)心管(guǎn)室(shì)溫放(fàng)置2小時或4℃過夜，使血清(qīng)析出(chū)。（將試管或離心(xīn)管(guǎn)傾(qīng)斜放置，使(shǐ)液麵(miàn)橫截麵(miàn)增大(dà)，能使(shǐ)血(xiě)清更大程(chéng)度的(dí)析出(chū)。）4℃ 1000×g離(lí)心20分鐘，仔細(xì)收(shōu)集上清(qīng)。建議(yì)將血清(qīng)分(fēn)裝(zhuāng)多(duō)份，-20℃或-80℃保存，避免反(fǎn)復(fù)凍融。
　　采血過(guò)程中應(yīng)避(bì)免(miǎn)溶血，因為紅(hóng)細(xì)胞裂解時會(huì)釋放(fàng)具(jù)有過氧(yǎng)化酶活性的(dí)物(wù)質(zhì)，在(zài)以HRP為標(biāo)記的ELISA檢(jiǎn)測(cè)中(zhōng)會有(yǒu)非特異性的(dí)顯(xiǎn)色，而(ér)導致檢測的不準(zhǔn)確性。同(tóng)時也(yě)應避免細菌汙染，因為(wéi)菌(jūn)體(tǐ)內(nèi)可能含有內(nèi)源(yuán)性(xìng)的(dí)HRP從而導致檢測(cè)的假陽性(xìng)。
　　2，  血漿(jiāng)
　　用含(hán)抗凝(níng)劑(jì)的采(cǎi)血管或離心管(guǎn)采集血液(yè)標本(běn)，標本采集後30min內4℃ 1000×g離心(xīn)15min，取上清即血漿。將上清分裝(zhuāng)多(duō)份，-20℃或-80℃保(bǎo)存，避免反復凍(dòng)融(róng)。避免(miǎn)使用溶血(xiě)或(huò)高血(xiě)脂的(dí)標本。
　　常用(yòng)的抗凝(níng)劑(jì)為(wéi)EDTA，肝素(sù)鈉和(hé)枸櫞酸(suān)鈉等(děng)，檢(jiǎn)測(cè)時(shí)還應(yīng)仔(zī)細閱讀試(shì)劑盒(hé)說(shuō)明(míng)書，檢查試劑盒是(shì)否(fǒu)對(duì)抗(kàng)凝劑有(yǒu)特殊要求(qiú)。
　　3，  細(xì)胞(bāo)培養上清(qīng)
　　取(qǔ)細胞(bāo)培(péi)養上清到(dào)離心(xīn)管(guǎn)，1000×g離心20min，除去(qù)細(xì)胞(bāo)碎(suì)片(piàn)及雜(zá)質(zhì)，取(qǔ)上(shàng)清，-20℃或(huò)-80℃保存(cún)，避免反(fǎn)復凍(dòng)融。
　　4，  細胞裂解液
　　1）  吸去培養板內(nèi)的培(péi)養基，用(yòng)胰(yí)酶(méi)消化(huà)細胞，加適(shì)量(liáng)培養基將細(xì)胞從培(péi)養(yǎng)板(bǎn)上吹下(xià)來。懸浮細胞可(kě)省略。
　　2）  收(shōu)集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用(yòng)預冷(lěng)的PBS潤洗3次。
　　3）  加(jiā)入適量(liáng)的預(yù)冷PBS或細胞(bāo)裂解液（臨(lín)用前加(jiā)入蛋白(bái)酶(méi)抑製劑(jì)）重懸細胞。通常6孔板(bǎn)一個孔的(dí)細胞量需(xū)要(yào)150~250μL PBS重懸(xuán)。
　　4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品(pǐn)冷凍，再放(fàng)室溫(wēn)解凍(dòng)樣(yàng)品(pǐn)，反復凍(dòng)融(róng)幾次，使細胞充(chōng)分裂解。也可將樣品(pǐn)進(jìn)行超(chāo)聲破碎，以(yǐ)達(dá)到(dào)裂解的(dí)目的。
　　5）  4℃ 10000×g 離(lí)心(xīn)10min，除去細(xì)胞(bāo)碎(suì)片(piàn)，取上(shàng)清，-20℃或-80℃保存(cún)，避(bì)免(miǎn)反復(fù)凍融(róng)。
　　5，組(zǔ)織匀漿液
　　1）  將組織樣本用(yòng)PBS (0.01M, PH 7.4) 衝(chōng)洗，洗去組織表麵殘(cán)留的(dí)血液或雜(zá)質。
　　2）  將組織(zhī)塊稱(chēng)重，記錄(lù)後剪碎，碎塊(kuài)應(yīng)盡量小(xiǎo)，便(biàn)於匀(yún)漿得更充(chōng)分(fēn)
　　3）  將(jiāng)組(zǔ)織(zhī)按(àn)一(yī)定(dìng)的(dí)比(bǐ)例加(jiā)入(rù)預冷(lěng)的(dí)PBS（臨用前(qián)加入(rù)蛋白酶抑製(zhì)劑(jì)）匀(yún)漿，匀漿時(shí)置(zhì)於冰上或冰(bīng)浴中。（通常(cháng)按(àn)組織重量
：PBS體(tǐ)積=1:9的比(bǐ)例(lì)匀(yún)漿，例如(rú)1g的組織樣本(běn)對(duì)應(yīng)9mL的(dí)PBS，具體(tǐ)體(tǐ)積(jī)可根據實驗需(xū)要(yào)適(shì)當調整(zhěng)，檢測後(hòu)計算樣品(pǐn)濃度(dù)時(shí)應(yīng)乘(chéng)以(yǐ)相(xiāng)應(yīng)的(dí)稀(xī)釋倍數(shù)）
　　4）  吸取(qǔ)匀漿液(yè)到(dào)離(lí)心(xīn)管(guǎn)，4℃ 5000×g 離(lí)心5~10min，取上清(qīng)，-20℃或-80℃保(bǎo)存(cún)，避免反(fǎn)復(fù)凍融(róng)。
　　6，  尿液，唾液(yè)等(děng)其他液體(tǐ)生物(wù)樣本(běn)
　　1000×g離心20min，取上清(qīng)即可(kě)檢測。
　　總(zǒng)的來(lái)說，因為(wéi)ELISA隻能檢(jiǎn)測(cè)可溶(róng)性(xìng)蛋白的(dí)含量(liáng)，所以應保(bǎo)證(zhèng)所(suǒ)有樣本均為澄清的(dí)液(yè)體，沉澱(diàn)或懸浮(fú)物都(dū)應(yīng)離心(xīn)去除。
　　為了(liǎo)保(bǎo)證(zhèng)檢測的準確性(xìng)，保存(cún)於(yú)-20℃或(huò)-80℃的樣(yàng)本(běn)在1~6個(gè)月內檢(jiǎn)測(cè)；4℃保存(cún)的(dí)樣(yàng)本應在(zài)1周內進(jìn)行(háng)檢測(cè)。
　　另(lìng)外，還應保(bǎo)證樣本不含(hán)NaN3，因為(wéi)NaN3會(huì)抑(yì)製HRP的(dí)活(huó)性，從(cóng)而導致(zhì)假陰性的結果。