淺析(xī)慢(màn)病毒包裝的主要(yào)流(liú)程

 　　慢病毒屬是(shì)反轉(zhuǎn)錄(lù)病毒(dú)科下的(dí)一個屬(shǔ)，包(bāo)括8種能夠感(gǎn)染人和脊椎(zhuī)動物(wù)的病毒，原發感(gǎn)染(rǎn)的細胞(bāo)以(yǐ)淋(lín)巴(bā)細(xì)胞和(hé)巨噬細胞為主(zhǔ)，感染(rǎn)個體(tǐ)zui終發病，慢病毒感(gǎn)染的(dí)顯(xiǎn)著特點(diǎn)是感(gǎn)染個(gè)體在(zài)出現(xiàn)典(diǎn)型的臨床症狀之前，大多經歷長(cháng)達數(shù)年的潛伏(fú)期，之後緩慢發(fā)病(bìng)，因此這(zhè)些(xiē)病原(yuán)體(tǐ)被(bèi)稱(chēng)為慢病(bìng)毒(dú)，例如(rú)：人類(lèi)免疫缺陷(xiàn)病毒(dú)(HⅣ），猴免(miǎn)疫缺(quē)陷(xiàn)病毒(SⅣ），馬傳染性貧(pín)血(EIA），貓(māo)免疫(yì)缺陷(xiàn)病毒(dú)(FⅣ）等(děng)等(děng)。
　　慢病毒包裝的(dí)主要流(liú)程：
　　1，慢病毒載體的(dí)構建：根(gēn)據不同(tóng)的研(yán)究(jiū)需求構(gòu)建慢病毒載體(tǐ)，如(rú)用於RNAi的(dí)慢(màn)病(bìng)毒載體(tǐ)，用於基因(yīn)過表達的慢(màn)病毒載(zǎi)體，用於啟(qǐ)動(dòng)子(zǐ)活(huó)性研(yán)究的慢病毒載(zǎi)體等；
　　2，慢(màn)病(bìng)毒包裝過程(chéng)：將重組病(bìng)毒(dú)質(zhì)粒(lì)及(jí)其輔(fǔ)助(zhù)包(bāo)裝質(zhì)粒共轉染至包(bāo)裝細胞中(zhōng)，收(shōu)集(jí)富含慢(màn)病(bìng)毒(dú)顆(kē)粒(lì)的(dí)細胞(bāo)上(shàng)清(qīng)液，對其濃縮(suō)後(hòu)得(dé)到(dào)高滴度(dù)的(dí)慢病毒濃縮液(yè)，在(zài)293T細(xì)胞(bāo)中測定並標(biāo)定病毒滴(dī)度。
　　慢病毒包裝的注(zhù)意事項(xiàng)：
　　1，在(zài)慢(màn)病毒感染(rǎn)細(xì)胞(bāo)前(qián)，為檢(jiǎn)測病毒上清培(péi)養(yǎng)液(yè)內病(bìng)毒(dú)的活性，並(bìng)確(què)定病(bìng)毒與(yǔ)轉染細(xì)胞之(zhī)間(jiān)的比率，需要確定病(bìng)毒(dú)的(dí)滴度。病(bìng)毒的滴度(dù)可以(yǐ)通過(guò)轉染Hela細胞(bāo)，然後使用抗體篩選(xuǎn)穩定的(dí)細胞轉染株，進行(háng)計數(shù)和(hé)數值統計(jì)。
　　2，在慢病毒轉染細胞的過程中zui重要的一(yī)步是(shì)融(róng)合，隻有(yǒu)一些(xiē)較小(xiǎo)的(dí)慢(màn)病毒載(zǎi)體(tǐ)才能轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)細(xì)胞，因此，病毒顆(kē)粒的(dí)吸附(fù)是(shì)慢(màn)病(bìng)毒轉(zhuǎn)染的(dí)限速步驟(zhòu)。
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