ELISA檢測(cè)中(zhōng)不(bù)同樣品應(yīng)有(yǒu)不同的(dí)處理方(fāng)法(fǎ)

 在(zài)進(jìn)行ELISA檢(jiǎn)測試驗(yàn)過(guò)程中，是否正(zhèng)確處理(lǐ)樣品(pǐn)是(shì)Elisa檢測的*步，也是zui重(zhòng)要的(dí)一步，一般來說(shuō)，可(kě)用於(yú)ELISA檢測的(dí)樣本(běn)包括血(xiě)清，血漿，細(xì)胞培(péi)養上清或(huò)組織匀漿(jiāng)液等(děng)等類型(xíng)，那麼(mó)這(zhè)幾種(zhǒng)不同(tóng)類型的樣本(běn)在處(chǔ)理(lǐ)方法(fǎ)上(shàng)都有什麼不(bù)同(tóng)呢(ní)？
　　1，對(duì)於血清(qīng)的(dí)處理
　　血(xiě)清是(shì)ELISA檢(jiǎn)測中(zhōng)zui常(cháng)見的一類樣(yàng)本(běn)，處(chǔ)理方法也(yě)比較簡單隻需(xū)用無熱原(yuán)，無內(nèi)毒(dú)素(sù)的(dí)試(shì)管(guǎn)或(huò)離心管(guǎn)采(cǎi)集(jí)血液標(biāo)本，將試(shì)管或離心管(guǎn)室(shì)溫(wēn)放置(zhì)2小(xiǎo)時或4℃過(guò)夜(yè)，使(shǐ)血清析出。在(zài)采(cǎi)血過(guò)程(chéng)中(zhōng)應避(bì)免溶(róng)血(xiě)，因為紅細胞(bāo)裂解時會(huì)釋放(fàng)具(jù)有(yǒu)過氧(yǎng)化(huà)酶活性的物質，在以HRP為標(biāo)記的(dí)ELISA檢(jiǎn)測中會(huì)有非特(tè)異性的(dí)顯色(sè)，而(ér)導致檢測的(dí)不(bù)準(zhǔn)確(què)性(xìng)。同時也應避(bì)免細(xì)菌汙染(rǎn)，因(yīn)為菌體內(nèi)可(kě)能(néng)含有內(nèi)源(yuán)性的HRP從而(ér)導(dǎo)致(zhì)檢(jiǎn)測(cè)的假(jiǎ)陽性。
　　2，對(duì)於血(xiě)漿(jiāng)的處(chǔ)理
　　對於(yú)血(xiě)漿(jiāng)的(dí)處理(lǐ)我們(mén)需要用含抗凝劑(jì)的(dí)采(cǎi)血管(guǎn)或(huò)離(lí)心(xīn)管采集血液(yè)標(biāo)本(běn)，標本(běn)采(cǎi)集後30min內4℃ 1000×g離(lí)心15min，取上清即(jí)血漿(jiāng)。將上清(qīng)分裝多份(fèn)，-20℃或-80℃保存(cún)，避(bì)免(miǎn)反復凍融。避免使用(yòng)溶血或高血脂的(dí)標(biāo)本(běn)。
　　3，對於細胞裂解液(yè)的處(chǔ)理
　　1）吸(xī)去培(péi)養板內(nèi)的培養基(jī)，用(yòng)胰(yí)酶消(xiāo)化(huà)細胞，加適量(liáng)培(péi)養基將(jiāng)細胞(bāo)從培養板上吹下來。懸浮(fú)細胞(bāo)可省略。
　　2）收集細胞(bāo)懸液，1000×g離心10min，棄去(qù)培(péi)養(yǎng)基(jī)，用預冷的PBS潤(rùn)洗3次。
　　3）加入適量的預(yù)冷PBS或(huò)細(xì)胞裂(liè)解液（臨(lín)用前(qián)加入蛋(dàn)白酶抑製(zhì)劑(jì)）重(zhòng)懸細(xì)胞。通常(cháng)6孔(kǒng)板一個(gè)孔(kǒng)的細胞(bāo)量(liáng)需要150~250μL PBS重(zhòng)懸。
　　4）將(jiāng)樣品(pǐn)放(fàng)入-20℃或-80℃，使樣品冷凍(dòng)，再(zài)放室溫(wēn)解(jiě)凍樣品，反復凍融幾次(cì)，使細(xì)胞(bāo)充(chōng)分裂(liè)解。也(yě)可將樣品進行超聲(shēng)破碎，以達到(dào)裂解(jiě)的目的(dí)。
　　5） 4℃ 10000×g 離心(xīn)10min，除去(qù)細(xì)胞碎片(piàn)，取上清(qīng)，-20℃或-80℃保存，避(bì)免(miǎn)反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
　　4，對於組(zǔ)織(zhī)匀漿液(yè)的處理(lǐ)方法
　　1）將(jiāng)組織樣本(běn)用PBS (0.01M, PH 7.4) 衝洗(xǐ)，洗去(qù)組織表麵(miàn)殘留(liú)的血液或雜(zá)質(zhì)。
　　2）將(jiāng)組織塊稱重，記錄(lù)後剪(jiǎn)碎，碎(suì)塊(kuài)應(yīng)盡(jìn)量(liáng)小，便(biàn)於(yú)匀漿得更充分(fēn)。
　　3）將組織按一(yī)定的比(bǐ)例加入預冷的(dí)PBS（臨用前(qián)加入蛋白(bái)酶抑(yì)製(zhì)劑）匀漿，匀漿(jiāng)時置(zhì)於冰(bīng)上或(huò)冰浴(yù)中。
　　4）吸取匀漿(jiāng)液(yè)到離心管，4℃ 5000×g 離心(xīn)5~10min，取上清，-20℃或(huò)-80℃保存(cún)，避免反(fǎn)復凍融。