*章(zhāng) Western Blot 簡介(jiè)

                    *章 Western Blot 簡介

1.1  Western Blot 原理

    與 Southern 或 Northern 雜(zá)交方法(fǎ)類似(sì)，但 Western Blot 采用(yòng)的是聚(jù)丙烯(xī)酰胺凝膠(jiāo)電泳(yǒng)，被檢(jiǎn)測(cè)物(wù)是蛋(dàn)白質，“探針"是(shì)抗體，“顯(xiǎn)色"用(yòng)標記(jì)的二(èr)抗。經過 PAGE 分離的蛋(dàn)白質樣(yàng)品(pǐn)，轉(zhuǎn)移(yí)到固(gù)相(xiāng)載(zǎi)體（例(lì)如硝酸纖維素薄膜(mó)）上，固相載體(tǐ)以(yǐ)非(fēi)共(gòng)價(jià)鍵(jiàn)形(xíng)式吸附(fù)蛋(dàn)白(bái)質(zhì)，且能保(bǎo)持電泳分(fēn)離(lí)的多肽(tài)類型及其(qí)生(shēng)物(wù)學(xué)活性不(bù)變。以固(gù)相載(zǎi)體上(shàng)的蛋白質或多肽(tài)作為抗原，與對應(yīng)的(dí)抗體(tǐ)起免(miǎn)疫反應(yīng)，再與(yǔ)酶或同位(wèi)素標(biāo)記的第二抗體(tǐ)起反應，經(jīng)過(guò)底物顯色(sè)或(huò)放(fàng)射自(zì)顯(xiǎn)影以檢測電泳分離(lí)的特異性目的基因表達的蛋白(bái)成分。該技(jì)術也(yě)廣泛應用於(yú)檢測(cè)蛋白水平的(dí)表(biǎo)達。

                                                     

1.2  Western Blot 優點

高(gāo)分辨(biàn)率的電泳(yǒng)技術

特(tè)異(yì)敏感的(dí)抗原-抗(kàng)體反(fǎn)應(yīng)

1-5 ng 中等大小的靶蛋白(bái)

Western Blot 結合了(liǎo)凝膠電泳(yǒng)的(dí)高(gāo)分辨率(shuài)和固(gù)相免疫(yì)測定的特異敏感(gǎn)等(děng)多種(zhǒng)優點，可檢測到(dào)低(dī)至 1～

5 ng（zui低可(kě)到 10～100 pg）中(zhōng)等大(dà)小(xiǎo)的(dí)靶蛋白。

1.3  Western Blot 應用(yòng)

目(mù)的(dí)蛋(dàn)白(bái)的表(biǎo)達(dá)特(tè)性分(fēn)析

目(mù)的(dí)蛋(dàn)白與其它蛋白的(dí)互作(zuò)

目(mù)的(dí)蛋(dàn)白的組織(zhī)定位

目的(dí)蛋(dàn)白的表達(dá)量分析(xī)

1.4  Western Blot 成功要素