實時熒光定量PCR儀是(shì)DNA定量(liáng)技術的一次(cì)飛躍。運(yùn)用該(gāi)項技術,我們(mén)可以(yǐ)對DNA,RNA樣(yàng)品進(jìn)行(háng)定量和(hé)定(dìng)性分(fēn)析(xī)。定(dìng)量分(fēn)析包括定量分(fēn)析和(hé)相(xiāng)對定(dìng)量(liáng)分析。前(qián)者可以(yǐ)得到某個樣(yàng)本(běn)中基(jī)因的拷(kǎo)貝(bèi)數(shù)和濃度;後者可以對(duì)不(bù)同(tóng)方式(shì)處理的兩個樣(yàng)本中的基(jī)因表達水(shuǐ)平進行比較(jiào)。除(chú)此之(zhī)外我(wǒ)們(mén)還(huán)可以對PCR產(chǎn)物或(huò)樣(yàng)品進行定(dìng)性分(fēn)析:例(lì)如利(lì)用熔(róng)解曲綫(xiàn)分析(xī)識別(bié)擴(kuò)增產(chǎn)物和(hé)引物(wù)二(èr)聚體,以(yǐ)區分(fēn)非特異擴增;利(lì)用(yòng)特異性(xìng)探針(zhēn)進行(háng)基因(yīn)型分析(xī)及(jí)SNP檢測(cè)等。目前(qián)實時熒光PCR技術已(yǐ)經(jīng)被廣(guǎng)泛應用於基(jī)礎科學(xué)研(yán)究(jiū),臨(lín)床診(zhěn)斷(duàn),疾病(bìng)研(yán)究及(jí)藥物研發(fā)等領(lǐng)域。其中主要(yào)的應用集中在以下幾(jī)個方(fāng)麵:
DNA或RNA的(dí)定量分(fēn)析。包(bāo)括病(bìng)原微生物(wù)或病毒含(hán)量(liáng)的檢(jiǎn)測(cè),轉基因(yīn)動(dòng)植物(wù)拷貝(bèi)數的(dí)檢(jiǎn)測,RNAi基(jī)因(yīn)失(shī)活率的檢測等。
基因(yīn)表達(dá)差(chà)異(yì)分析。例(lì)如比較(jiào)經過(guò)不同(tóng)處(chǔ)理樣本之間特定(dìng)基因的(dí)表達差(chà)異(yì)(如藥物(wù)處(chǔ)理,物理處(chǔ)理,化學處理等),特定基因(yīn)在(zài)不同時相的表達差(chà)異(yì)以及cDNA或(huò)差顯(xiǎn)結果的(dí)確證(zhèng)。
基因分型。例(lì)如(rú)SNP檢測,甲基化檢測等。
熒光(guāng)定量PCR儀對(duì)病原體(tǐ)檢(jiǎn)測和遺傳是怎樣的應用?
病(bìng)原(yuán)體檢測:
目前(qián),采(cǎi)用熒光(guāng)定(dìng)量PCR儀檢(jiǎn)測技術可以(yǐ)對(duì)淋球菌,沙(shā)眼衣原體(tǐ),解(jiě)脲(niào)支(zhī)原體,人類乳(rǔ)頭瘤病(bìng)毒,單純皰(pào)疹(zhěn)病(bìng)毒,肝(gān)炎病(bìng)毒(dú),結(jié)核(hé)杆菌(jūn),細(xì)小病(bìng)毒(dú)B19,EB病毒和(hé)人(rén)巨細胞病毒(dú)等病原(yuán)體(tǐ)進(jìn)行(háng)定量測定。與(yǔ)傳(chuán)統的檢測(cè)方(fāng)法相比具(jù)有靈(líng)敏度(dù)高(gāo),取樣(yàng)少,快速簡便(biàn)等(děng)優(yōu)點。
遺傳及(jí)優(yōu)生優育診(zhěn)斷:
到(dào)目前(qián)為(wéi)止,人(rén)們(mén)對遺傳性物(wù)質改變引(yǐn)起(qǐ)的遺(yí)傳(chuán)性疾病還無(wú)法治療,隻(zhī)能通過(guò)產前監測,減(jiǎn)少病嬰出生(shēng),以(yǐ)防止各(gè)類遺(yí)傳(chuán)性疾(jí)病(bìng)的發生(shēng),如(rú)為(wéi)減少X連鎖遺(yí)傳病患(huàn)兒的出生,從孕(yùn)婦(fù)的(dí)外周血(xiě)中(zhōng)分離胎兒DNA,用(yòng)實時(shí)熒光(guāng)定量(liáng)PCR檢(jiǎn)測(cè)其(qí)Y性別決定(dìng)區基(jī)因是(shì)一種無創傷性的(dí)方法(fǎ),易為(wéi)孕(yùn)婦所接受。例外還(huán)可以(yǐ)通過(guò)實時熒光(guāng)定(dìng)量PCR對孕(yùn)婦弓形蟲(chóng),梅(méi)毒(dú)等檢測,這(zhè)對(duì)找出不(bù)明原因流產(chǎn)和(hé)習(xí)慣(guàn)性(xìng)流產的病(bìng)因提供(gōng)有力的幫(bāng)助,大大提高優生優育。