用於生物(wù)顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)觀察的(dí)標本應該具備什麼(mó)樣的(dí)條件(jiàn)

　　用於(yú)生物顯微(wēi)鏡(jìng)觀察(chá)的標本應該(gāi)具備什(shí)麼(mó)樣的(dí)條件
　　用於(yú)生(shēng)物(wù)顯微鏡觀察的標(biāo)本(běn)必經(jīng)經(jīng)過一定(dìng)的準(zhǔn)備(bèi)過(guò)程才能在顯微(wēi)鏡下(xià)形成清(qīng)晰(xī)的像i在入射(shè)照(zhào)明(míng)和透(tòu)射照明中，對於標(biāo)本的光學要求(qiú)有(yǒu)很大區(qū)別(bié)，在入(rù)射照(zhào)明(míng)中(zhōng)傷是(shì)由標(biāo)本(běn)的(dí)反射光所(suǒ)形成(chéng)的(dí)；相反(fǎn)，在(zài)進(jìn)射照(zhào)明中保(bǎo)是由透(tòu)射(shè)光(guāng)所形成(chéng)的(dí)，在這(zhè)種情況(kuàng)下(xià)反射光(guāng)對於像的形成不僅無益(yì)，而且會降低像的清晰度(dù)。
　　用(yòng)入射光觀察的標(biāo)本(běn)，它的(dí)準(zhǔn)備(bèi)工(gōng)作(zuò)十(shí)分簡(jiǎn)單，隻是清(qīng)潔(jié)標本的表麵並(bìng)切割為(wéi)適當(dāng)大(dà)小的小(xiǎo)塊。而用(yòng)透射光(guāng)觀察(chá)的(dí)標(biāo)本，必(bì)須具有由於光(guāng)吸(xī)收的差異而產(chǎn)生(shēng)的一(yī)定反(fǎn)差，才(cái)能在(zài)顯微(wēi)鏡下(xià)披觀察到(dào)。為此，標本必(bì)須經過一係列(liè)復雜的(dí)處(chǔ)理和(hé)製備過(guò)程(chéng)，這(zhè)種(zhǒng)製備(bèi)技術就是我們(mén)一般(bān)所說(shuō)的(dí)生(shēng)物顯微(wēi)鏡技(jì)術。
　　從光學觀點(diǎn)出發，對(duì)於用透(tòu)射光觀(guān)察的(dí)顯(xiǎn)微(wēi)鏡標本有如下要(yào)求：
　　(1)適當的厚度(dù)。這種厚度在較好的光學係(xì)統中(zhōng)能夠達到盡可(kě)能(néng)高的分(fēn)辨(biàn)力(lì)，且(qiě)與(yǔ)這(zhè)個(gè)係(xì)統(tǒng)的(dí)場探相(xiāng)適應。
　　(2)足夠的透(tòu)明度(dù)。
　　(3)能(néng)夠形成(chéng)建立在(zài)吸收(shōu)差異(yì)上的足夠(gòu)的(dí)反差。
　　實際上所(suǒ)有的(dí)生(shēng)物(wù)學(xué)材料通過(guò)石措(cuò)包(bāo)埋，切片(piàn)(或塗(tú)片)，貼(tiē)附(fù)，溶蠟，透(tòu)明等過程(chéng)，能夠得(dé)到在厚度(dù)和透明度上符各要(yào)求(qiú)的(dí)標本(běn)，然(rán)後(hòu)通過(guò)染色程序(xù)得(dé)到(dào)一定程度的(dí)反差(chà)。
　　通常在(zài)透(tòu)射(shè)式生物顯微(wēi)鏡(jìng)中所(suǒ)使(shǐ)用(yòng)的(dí)生(shēng)物學和(hé)醫學(xué)組織切片(piàn)，它的厚(hòu)度一(yī)般(bān)為3—7μm。在這個(gè)厚(hòu)度(dù)範(fàn)圍(wéi)內，當使(shǐ)用低倍物(wù)鏡(例(lì)如(rú)10×)觀察時(shí)，場深(shēn)對於(yú)觀察(chá)整(zhěng)個切(qiē)片厚(hòu)度是*足(zú)夠(gòu)的；當(dāng)使用高信物(wù)鏡(jìng)(例(lì)如100×)觀(guān)察(chá)時(shí)，場(cháng)深僅僅是這(zhè)個(gè)切片厚度(dù)的很(hěn)小(xiǎo)部(bù)分(圖4．8)，不斷地從上到(dào)下移(yí)動細調(tiáo)可(kě)以得(dé)到(dào)切片(piàn)的總體印象(xiàng)。因此，5—7μm厚的常規(guī)切(qiē)片可(kě)以被(bèi)認為(wéi)是在(zài)低(dī)放(fàng)大(dà)倍(bèi)數和高(gāo)放大倍數理想(xiǎng)情況之間的調(tiáo)和，兩(liǎng)者都較(jiào)好地(dì)考慮到了場(cháng)深(shēn)和(hé)分辨力(lì)。同(tóng)時(shí)由(yóu)於種種原因，這種調和的(dí)厚(hòu)度(dù)也滿(mǎn)足(zú)了(liǎo)實際工作中的(dí)許多要求，首(shǒu)先物體(tǐ)的細(xì)微結(jié)構不總是直要(yào)的(dí)；其次在很薄(1—2μm)的(dí)切(qiē)片中(zhōng)生物(wù)標(biāo)本(běn)中(zhōng)的(dí)立體關係(xì)就看(kàn)不到(dào)了(liǎo)；與此(cǐ)相(xiāng)反，當使用8—10μm或者更(gēng)厚的(dí)切(qiē)片(piàn)時，除(chú)了分辨力上可覺(jué)察的損(sǔn)失(shī)而外，還會引(yǐn)起生物(wù)標本中(zhōng)不(bù)同層(céng)次的互相重疊。
　　經過固(gù)定，包(bāo)埋，切片，溶(róng)蠟，透明等(děng)處(chǔ)理之後(hòu)的動植物(wù)材料標(biāo)本(běn)是足夠薄和(hé)透明的(dí)了，但是反差很小，並且(qiě)這種反差主(zhǔ)要來(lái)自於(yú)折射和衍射。顯然，這(zhè)種(zhǒng)標(biāo)本在(zài)反(fǎn)差(chà)上是(shì)遠(yuǎn)不理想的(dí)。但是這(zhè)可(kě)以(yǐ)通(tōng)過降(jiàng)低折射效果給(gěi)它(tā)覆蓋上“吸收(shōu)物質(zhì)”，並通過吸(xī)收的差異(yì)而(ér)增大(dà)反(fǎn)差(chà)。在(zài)標(biāo)本與周(zhōu)圍區(qū)域之間的(dí)折射(shè)，可以(yǐ)通過(guò)把標本封(fēng)藏在加(jiā)拿(ná)大樹被或其(qí)他人工合成的封(fēng)藏(cáng)介質中的方(fāng)法而減(jiǎn)小。所(suǒ)有這些封(fēng)藏介質經過揮(huī)發(fā)或(huò)聚(jù)合(hé)使其(qí)變(biàn)硬(yìng)之(zhī)後，它(tā)們(mén)的折射率就(jiù)接(jiē)近(jìn)被固定或被(bèi)脫水的動植物(wù)組織主要成(chéng)分(fēn)的折(zhē)射(shè)率。在大多數動植物組織中(zhōng)這個數值為1．5l一1．54。同(tóng)時(shí)用(yòng)這個方法還(huán)可以(yǐ)消(xiāo)除(chú)蓋玻(bō)片下麵(miàn)的反射(shè)引(yǐn)起(qǐ)的閃光。
　　已(yǐ)經應用了(liǎo)一(yī)個(gè)多世紀(jì)，並(bìng)且能(néng)夠給(gěi)生物顯微(wēi)鏡(jìng)標本(běn)帶來較(jiào)好(hǎo)反(fǎn)差的有效方法是(shì)染(rǎn)色。一般沒(méi)有染色的生(shēng)物(wù)標本(běn)，特(tè)別(bié)是(shì)當放置(zhì)在具(jù)有(yǒu)與生物標本相(xiāng)近折射(shè)率的介質(zhì)中(zhōng)時，像的反差(chà)是(shì)很(hěn)小(xiǎo)的(dí)。在(zài)染(rǎn)色的標本(běn)中(zhōng)，像的(dí)反差的增大(dà)是(shì)建(jiàn)立(lì)在(zài)染(rǎn)料選(xuǎn)擇性分(fēn)布的(dí)基礎上。染(rǎn)色(sè)與未染(rǎn)色(sè)標本(běn)在反(fǎn)差(chà)上有(yǒu)巨大差(chà)異(yì)。
　　生(shēng)物(wù)切片(piàn)經常(cháng)粘貼在具有26×76mm標準尺寸(cùn)和(hé)1.1—1.3mm厚度(dù)的(dí)裁玻片上，裁(cái)成(chéng)片(piàn)的(dí)兩麵(miàn)應(yīng)是平(píng)行(háng)平(píng)麵(miàn)。對於(yú)裁濃件(jiàn)厚(hòu)度的(dí)要(yào)求不(bù)是很嚴格的(dí)，但(dàn)是當它(tā)的(dí)厚度超過(guò)一些較高(gāo)矯正程度集光(guāng)器(qì)的自(zì)由(yóu)工(gōng)作(zuò)距離(lí)時，裁(cái)玻(bō)片厚(hòu)度(dù)對於(yú)聚焦光源以(yǐ)及在物體(tǐ)平麵(miàn)上(shàng)形成(chéng)祝(zhù)場(cháng)光闌的(dí)像(xiàng)就(jiù)變(biàn)得重要(yào)了。對(duì)於這種(zhǒng)情(qíng)況，厚(hòu)度為0.9—1.0mm的(dí)裁玻片(piàn)是比(bǐ)較合適(shì)的。