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DNA抽提和(hé)純化(huà)方(fāng)法介(jiè)紹(shào):
一,酚抽(chōu)提(tí)法(fǎ):先(xiān)用(yòng)蛋(dàn)酶(méi)K,SDS破碎(suì)細胞(bāo),消化(huà)蛋白,然後(hòu)用(yòng)酚(fēn)和酚(fēn)-氯(lǜ)DNA大小為(wéi)100-150kb
二,甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上(shàng),然後用(yòng)高濃度甲(jiǎ)酰胺解聚(jù)蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合(hé),再透析獲(huò)得DNA可得DNA200kb左右。
三(sān),玻璃(lí)棒(bàng)纏(chán)繞(rào)法(fǎ):用鹽(yán)酸胍(guā)裂解(jiě)細胞,將裂(liè)解(jiě)物鋪於乙醇(chún)上(shàng),然後用(yòng)帶(dài)鉤或U型玻璃(lí)棒(bàng)在界(jiè)麵輕攪(jiǎo),DAN沉(chén)澱(diàn)液(yè)繞(rào)於玻棒。生(shēng)成(chéng)DNA約(yuē)80kb。
四(sì),異丙醇(chún)沉(chén)澱法(fǎ):基(jī)本同(tóng)1法,僅(jǐn)用二(èr)倍容(róng)積異丙(bǐng)醇替代(dài)乙醇,可去除小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)RNA(在(zài)異丙(bǐng)醇中(zhōng)可溶(róng)狀態)
五,表(biǎo)麵活性劑(jì)快(kuài)速(sù)製備法(fǎ):用Triton X-100A或(huò)NP40表麵(miàn)活性劑(jì)破(pò)碎(suì)細胞(bāo),然後用蛋白酶K或酚去(qù)除(chú)蛋(dàn)白,乙醇(chún)沉(chén)澱或(huò)透(tòu)析(xī)。
六(liù),加熱法(fǎ)快(kuài)速製備:加(jiā)熱96℃-100℃,五分(fēn)鐘,然(rán)後(hòu)離(lí)心後(hòu)取上清,可(kě)用於(yú)PCR反應(yīng)。
七(qī),鹼變性快(kuài)速製備(bèi):先用NaOH作用(yòng)20分鐘,再加HCI中(zhōng)和(hé),離(lí)心後(hòu)取上(shàng)清,含少量(liáng)DNA。