進(jìn)口紫外(wài)分光光(guāng)度計(jì)技術(shù)問(wèn)題指南

 　　進(jìn)口紫(zǐ)外(wài)分光光(guāng)度(dù)計(jì)自建(jiàn)立(lì)至(zhì)今(jīn)已有四十多年(nián)的歷史，各(gè)種(zhǒng)通用(yòng)型分光光度(dù)計(jì)在國(guó)外(wài)應用已(yǐ)相當普遍(biàn)，但國(guó)產的分光光度計仍以(yǐ)單波長(cháng)法(fǎ)為主(zhǔ)。國內有人(rén)根據(jù)紫外分光法的基本原理(lǐ)，因陋(lòu)就簡(jiǎn)，利用普(pǔ)通的分(fēn)光(guāng)光度計(jì)建測(cè)定(dìng)法(fǎ)，即先用某一(yī)波長比色(sè)，記錄(lù)吸光(guāng)度(dù)，再(zài)用(yòng)另(lìng)一(yī)波長比色後記錄另一(yī)吸(xī)光(guāng)度，然後按(àn)紫外分(fēn)光(guāng)法進行計算(suàn)，獲得(dé)了(liǎo)較(jiào)滿意(yì)的結果。近(jìn)年(nián)來(lái)，應(yīng)用紫外分(fēn)光(guāng)法並結合(hé)後分(fēn)光(guāng)技(jì)術(shù)的全(quán)自動生化(huà)分(fēn)析儀已大量引進到(dào)國(guó)內，但除了(liǎo)廠家(jiā)提供(gōng)的數(shù)據外(wài)，不少(shǎo)人在進口(kǒu)紫外(wài)分(fēn)光光(guāng)度(dù)計(jì)上自行編製(zhì)試(shì)驗(yàn)程(chéng)序時(shí)對次波(bō)長選擇(zé)的重(zhòng)要(yào)性往往認(rèn)識不足(zú)，具(jù)有較(jiào)大的(dí)隨意性，由此(cǐ)造成(chéng)試(shì)驗(yàn)結(jié)果(guǒ)誤差還(huán)不知(zhī)原因所在(zài)，因(yīn)此(cǐ)有(yǒu)必要加(jiā)強對(duì)紫外(wài)分(fēn)光(guāng)法和後分(fēn)光技術的認(rèn)識(shí)。但(dàn)可以預(yù)見(jiàn)，隨著(zhuó)*儀器的(dí)引進以(yǐ)及進口(kǒu)紫(zǐ)外(wài)分光光度計逐(zhú)步進(jìn)入(rù)市(shì)場(cháng)，這(zhè)一新(xīn)技(jì)術(shù)必將(jiāng)為(wéi)越來(lái)越(yuè)多(duō)的(dí)人所認識和(hé)接受，並在醫學(xué)檢(jiǎn)驗(yàn)領(lǐng)域得到廣(guǎng)泛的(dí)應用(yòng)。
　　文(wén)獻指出(chū)影響進口(kǒu)紫(zǐ)外(wài)分(fēn)光光度計測定精密度(dù)的(dí)因素是(shì)
：光輻射噪(zào)聲，電源(yuán)不(bù)穩和讀(dú)出(chū)噪聲，采用強(qiáng)光源可以(yǐ)改善測定的精密度。當(dāng)試樣中含有幹擾(rǎo)物質時，由於雙(shuāng)波長法(fǎ)減少(shǎo)了樣品(pǐn)的(dí)形(xíng)式(shì)誤(wù)差，故測定(dìng)的(dí)精密度優於(yú)單(dān)波(bō)長法。
　　影響進口紫外(wài)分(fēn)光光度計準確(què)度(dù)的因(yīn)素(sù)是
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　　①由化(huà)學幹(gān)擾物引(yǐn)起(qǐ)的誤(wù)差，但這種誤(wù)差要比單(dān)波長(cháng)法小(xiǎo)得多。
　　②由物理幹(gān)擾引起(qǐ)的誤差，但可(kě)以通過(guò)采用較小的雙(shuāng)波長(cháng)差(chà)等(děng)方法來減少誤差(chà)，而且這種誤(wù)差本身就比單(dān)波(bō)長法更小(xiǎo)。
　　③由儀器的非理想(xiǎng)性(xìng)如(rú)比色杯的(dí)性質和(hé)位置，以及信(xìn)號失調(tiáo)，狹縫(féng)過大(dà)和雜散(sàn)光等引起(qǐ)的誤差，其中(zhōng)尤(yóu)以(yǐ)後(hòu)者(zhě)引起(qǐ)的誤差為大，因此要求進(jìn)口紫外(wài)分(fēn)光光度(dù)計(jì)的波長精度在高(gāo)並且(qiě)盡(jìn)量(liáng)減少雜散光。
　　所謂後分光(guāng)技術是相(xiāng)對(duì)傳統的分光光度計(jì)而(ér)言的(dí)。*，光電比(bǐ)色法賴(lài)以(yǐ)建立的Lambert—Beer定(dìng)律隻(zhī)適用(yòng)於單(dān)色(sè)光，單色光純度越高則測(cè)定(dìng)結(jié)果(guǒ)的精密度和準確(què)度越(yuè)好，如果用混(hùn)合光(guāng)比(bǐ)色(sè)，則溶液的吸光度(dù)與(yǔ)液層(céng)厚度和溶液(yè)濃度間不(bù)成比(bǐ)例(lì)關(guān)係。因(yīn)此，傳統(tǒng)的(dí)進(jìn)口紫外分光(guāng)光度計(jì)是以單色器（棱鏡(jìng)或光(guāng)柵）對入(rù)射光(guāng)進行分(fēn)光，然(rán)後使(shǐ)特(tè)定波長的單色光通過待測(cè)溶(róng)液進(jìn)行比色測(cè)定(dìng)，而現(xiàn)代(dài)生(shēng)化分析儀(yí)上采(cǎi)用所謂(wèi)後分光技術的分(fēn)光光度計則(zé)是直接(jiē)以(yǐ)光源燈所(suǒ)發(fā)出的混合光透(tòu)過(guò)待(dài)測(cè)溶液(yè)，經(jīng)溶液吸(xī)收後(hòu)再用全(quán)息(xī)光柵(zhà)（Holographic Grating，是(shì)目(mù)前zui的分光器(qì)件(jiàn)，進口紫外(wài)分(fēn)光光(guāng)度(dù)計(jì)既可(kě)以簡(jiǎn)化(huà)光(guāng)路，又可以(yǐ)減少(shǎo)雜散(sàn)光，由它色散後投(tóu)射(shè)到(dào)二(èr)極管矩(jǔ)陣(zhèn)上的光(guāng)譜焦(jiāo)平麵的波長精(jīng)度(dù)在(zài)±2nm以(yǐ)內(nèi)）[6]對出(chū)射光進行分光，然後將純(chún)度很高的不同(tóng)波(bō)長的單色(sè)光(guāng)折射(shè)到光電(diàn)二極管矩陣(zhèn)（Photodiode Array）上，由於位置(zhì)不同，矩(jǔ)陣(zhèn)上的每一個(gè)光(guāng)電(diàn)二極(jí)管(guǎn)隻能接收某個特定波長的(dí)單色光(guāng)。有人據此認(rèn)為這(zhè)種類型(xíng)的進口紫外分光(guāng)光(guāng)度計隻(zhī)是(shì)用(yòng)某幾個(gè)波長的濾光板，光不純，波長精度差，其實(shí)這是(shì)一種(zhǒng)誤解(jiě)。這種儀(yí)器(qì)在編(biān)製(zhì)程(chéng)序(xù)時(shí)（廠(chǎng)家(jiā)或(huò)用(yòng)戶）已(yǐ)預先(xiān)設(shè)定好(hǎo)某(mǒu)項試驗(yàn)選用(yòng)某(mǒu)個(gè)波(bō)長，儀器工作(zuò)時(shí)在微機(jī)的(dí)控(kòng)製(zhì)下(xià)隻接(jiē)收所(suǒ)選(xuǎn)波(bō)長的(dí)光(guāng)電管(guǎn)上產(chǎn)生(shēng)的電信(xìn)號(hào)並(bìng)將其(qí)轉變成相應(yīng)的吸(xī)光(guāng)度(dù)。
　　目前的(dí)大多數生(shēng)化(huà)分(fēn)析儀的(dí)二(èr)極管(guǎn)矩(jǔ)陣(zhèn)都有7到10個光(guāng)電二極管，包含(hán)了從340nm～700nm範圍內(nèi)常用(yòng)的(dí)7～10個(gè)測定(dìng)波(bō)長[4,5]，有的(dí)分(fēn)析儀(yí)甚至(zhì)多達(dá)16個波(bō)長。由於(yú)現(xiàn)代(dài)生化分析儀(yí)采用凹(āo)麵全(quán)息(xī)光(guāng)柵為後(hòu)分光(guāng)器件，從而(ér)取(qǔ)消了(liǎo)斬光器(qì)。使進(jìn)口紫(zǐ)外(wài)分光光度計的(dí)結(jié)構變得(dé)相(xiāng)對(duì)簡單，而且更(gēng)為(wéi)關鍵的(dí)是，采用(yòng)這種(zhǒng)結構(gòu)的(dí)後分光技(jì)術使生(shēng)化(huà)分析儀(yí)上(shàng)多(duō)頂(dǐng)目同(tóng)時測定變(biàn)為(wéi)現(xiàn)實(shí)。否(fǒu)則，如果仍按傳(chuán)統分光光(guāng)度計(jì)一(yī)樣以單(dān)色(sè)光進(jìn)行比色測定，為適(shì)應(yīng)不同頂(dǐng)目(mù)在短(duǎn)時(shí)間內用不(bù)同波長(cháng)比色的需(xū)要，進口(kǒu)紫(zǐ)外分(fēn)光光度計分光(guāng)器件(jiàn)必(bì)須(xū)在幾(jī)秒(miǎo)甚至(zhì)更短(duǎn)的(dí)時(shí)間內頻繁(fán)地(dì)變(biàn)動(dòng)反射鏡(jìng)的位(wèi)置，這(zhè)對(duì)於機械來(lái)說是難以辦(bàn)到(dào)的，即(jí)使製成也(yě)會易於損壞(huài)而缺(quē)乏實(shí)用(yòng)價值(zhí)。後分(fēn)光技術(shù)的建立使上述(shù)問題迎刃而解，而(ér)且使雙(shuāng)波(bō)長(cháng)分光光度(dù)法變得更為實用(yòng)。