DMEM培養(yǎng)基(jī)是(shì)一種含各種(zhǒng)氨(ān)基酸和(hé)葡(pú)萄糖的培(péi)養(yǎng)基,是(shì)在MEM培(péi)養(yǎng)基的基礎上(shàng)研製的。與(yǔ)MEM比(bǐ)較(jiào)增加了各(gè)種成(chéng)分用(yòng)量(liáng),同時又分(fēn)為高糖型(xíng)(低(dī)於4500mg/L)和(hé)低(dī)糖(táng)型(xíng)(低於(yú)1000mg/L)。高(gāo)糖(táng)型有(yǒu)利於(yú)細(xì)胞停泊於一個(gè)位(wèi)置生長,適於生長(cháng)較快,附著較困難(nán)腫瘤(liú)細(xì)胞等(děng)。
比(bǐ)較MEM和(hé)DMEM培養(yǎng)基對(duì)破骨(gǔ)細胞(bāo)前體(tǐ)細胞(bāo)RAW264.7分化的影響。
方(fāng)法(fǎ):
(1)根據培養基以及是否包括核因子2B配體的受體因子(zǐ)激活劑(jì)(RANKL)將(jiāng)細(xì)胞分組:M-MEM培(péi)養基(jī)組,補充AN-MEMRANKL的(dí)培養(yǎng)基(jī)組(zǔ),高葡萄糖DMEM培養基組,高(gāo)補充(chōng)糖(táng)DMEM培養基組(zǔ)RANKL;
(2)在(zài)培(péi)養(yǎng)的第三(sān)天(tiān)收集細(xì)胞,並(bìng)監測(cè)與分(fēn)化相關的標誌(zhì)物(wù)酒石酸抗性(xìng)酸性磷(lín)酸酶(TRP)和qPCR以(yǐ)及(jí)通過Western印(yìn)跡激活的(dí)T細(xì)胞(bāo)的(dí)活(huó)性成分(fēn)。核(hé)因(yīn)子(zǐ)κB受體(tǐ)激活分裂因子(核因子1b,RANK受(shòu)體(tǐ)衰減劑(jì))和(hé)組(zǔ)織(zhī)蛋白(bái)酶(méi)(組(zǔ)織蛋(dàn)白酶)KmRNA和蛋白(bái)質表達(dá)水(shuǐ)平以(yǐ)及成年成(chéng)骨(gǔ)細胞生成成骨(gǔ)細胞(bāo)後成骨(gǔ)細(xì)胞(bāo)的(dí)RW47的(dí)RWAnPlastRNAKAAls。關(guān)於(yú)破(pò)骨細胞分(fēn)化(huà)為M-MEM的研究和(hé)高(gāo)糖的結果進(jìn)行了研究。
結果:
(1)與添(tiān)加了RANKL的高葡(pú)萄糖DMEM培養基(jī)相比,通(tōng)過RANKL偶聯的MEM培養(yǎng)基的(dí)RAWmRNA表達水(shuǐ)平為64.7。增加細胞(bāo)中TRP,NFATC1,RANK和組(zǔ)織蛋白酶K,TRP,NFATC1和組織(zhī)蛋(dàn)白酶(méi)K的蛋白質表達水平;
(2)通(tōng)過(guò)向(xiàng)培養基(jī)或(huò)高葡萄糖DMEM培養基中添(tiān)加R-MEM,可以(yǐ)將RAW264.7細胞分化(huà)為(wéi)成(chéng)年的(dí)破(pò)骨細胞(bāo),但是在RANKL處理的MEM培(péi)養(yǎng)基中(zhōng)會產(chǎn)生成熟細(xì)胞(bāo)。更(gēng)多(duō)的骨細胞。結(jié)論在RAW264.7細胞中加入RANKLM-MEM培養(yǎng)基分化為(wéi)破骨細胞是有益(yì)的。