細(xì)胞養不(bù)好(hǎo)?這(zhè)些注意(yì)事(shì)項請收好
1,購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡(wáng)或(huò)存活(huó)率不(bù)佳可(kě)能(néng)原因(yīn)?細(xì)胞冷凍管(guǎn)解(jiě)凍後(hòu),為何會(huì)有(yǒu)細胞數(shù)目太(tài)少(shǎo)的情形?
研究人員(yuán)在細胞(bāo)培養(yǎng)時出(chū)現存活(huó)率不佳(jiā),常見原因(yīn)可歸納(nà)為(wéi):培(péi)養(yǎng)基(jī)使用錯誤或培(péi)養基品(pǐn)質(zhì)不(bù)佳;血清(qīng)使用錯誤(wù)或血清(qīng)的品質不佳;解凍(dòng)過程(chéng)錯誤(wù);冷凍(dòng)細(xì)胞解(jiě)凍後(hòu),加(jiā)以(yǐ)洗滌細胞和(hé)離(lí)心(xīn);懸(xuán)浮細胞誤認為死細胞;培(péi)養(yǎng)溫(wēn)度使用錯誤(wù);細胞置於–80℃太(tài)久(jiǔ)。
研(yán)究人(rén)員在(zài)冷凍(dòng)細胞培養時出(chū)現細胞(bāo)數(shù)目(mù)太(tài)少,大(dà)都是(shì)因為(wéi)離心(xīn)過(guò)程操(cāo)作上(shàng)的(dí)失(shī)誤,造(zào)成細胞(bāo)的(dí)物理(lǐ)性(xìng)損傷(shāng),以(yǐ)及(jí)細(xì)胞(bāo)流失。建議細(xì)胞(bāo)解(jiě)凍後不(bù)要立刻離心,應(yīng)待(dài)細(xì)胞生長隔(gé)夜(yè)後再(zài)更換培(péi)養基(jī)即可(kě)。
2,收(shōu)到的冷(lěng)凍管(guǎn)瓶身(shēn)破裂,瓶蓋(gài)有裂紋,或瓶蓋脫(tuō)落的原(yuán)因?
冷(lěng)凍管(guǎn)瓶蓋裂紋(wén),或瓶身(shēn)破裂,可能是(shì)因為操作(zuò)者夾取(qǔ)冷(lěng)凍(dòng)管時(shí)用力(lì)不(bù)當,造(zào)成冷凍(dòng)管裂損(sǔn),建(jiàn)議使用止血鉗小心夾取。另冷凍(dòng)管瓶蓋(gài)鬆動或(huò)鬆脫,是(shì)因熱(rè)脹冷縮(suō)的物理(lǐ)現象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞(bāo)汙染(rǎn),故冷(lěng)凍管(guǎn)於(yú)放入(rù)和取(qǔ)出(chū)液(yè)氮(dàn)桶時,均(jūn)應立(lì)刻將(jiāng)冷凍(dòng)管(guǎn)再一次扭緊。
3,如(rú)何(hé)選用(yòng)特殊(shū)細胞係培養(yǎng)基?
培養某(mǒu)一(yī)類型細(xì)胞沒有固(gù)定的(dí)培養條(tiáo)件。在(zài)MEM中(zhōng)培養的細胞(bāo),很(hěn)可(kě)能在(zài)DMEM或M199中(zhōng)同(tóng)樣(yàng)很(hěn)容易生長。總(zǒng)之,優選MEM做粘(nián)附細胞培養,RPMI-1640做懸浮細胞(bāo)培養是一(yī)個好的開(kāi)始(shǐ),各種目(mù)的無(wú)血(xiě)清(qīng)培養(yǎng)*好優(yōu)選AIMV(12005)培養基(jī)(SFM)。
4,L-穀(gǔ)氨(ān)酰胺在細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)中(zhōng)重(zhòng)要(yào)嗎(má)?它在(zài)溶(róng)液中(zhōng)不穩(wěn)定嗎(má)?
L-穀(gǔ)氨酰胺在細(xì)胞(bāo)培(péi)養時是重要(yào)的(dí)。脫掉氨基(jī)後,L-穀氨酰(xiān)胺(àn)可(kě)作為培養細(xì)胞的(dí)能量來源(yuán),參與(yǔ)蛋(dàn)白(bái)質的合成(chéng)和(hé)核酸代(dài)謝(xiè)。L-穀(gǔ)氨(ān)酰(xiān)胺在溶(róng)液中經過一段(duàn)時(shí)間(jiān)後(hòu)會降(jiàng)解,但(dàn)是確切(qiē)的(dí)降(jiàng)解率一直沒有(yǒu)*終定(dìng)論。L-穀(gǔ)氨(ān)酰(xiān)胺(àn)的降(jiàng)解導致(zhì)氨的形成(chéng),而氨對於(yú)一(yī)些細胞具(jù)有(yǒu)毒性。